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本研究选择19-去甲睾酮(19-nortestosterone,19-NT)为研究对象,研制了用于检测19-NT残留的竞争性胶体金免疫层析试纸条。利用胶体金的显色原理达到快速检测样品中19-NT的残留。将19-去甲睾酮经羧甲基羟胺肟化,然后采用混合酸酐法将肟化产物分别与牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联,分别制备19-NT免疫原和包被抗原。采用柠檬酸三钠还原法制备了18.6nm左右的胶体金溶液。在标记19-NT多克隆抗体时,最佳pH值范围在8.6~ 9.8之间,最适标记抗体浓度为30μg/ml。选用Waterman公司的Purabind RP硝酸纤维膜,德国Schleicher&Schuell公司的Glass33玻璃纤维膜,上海金标有限公司的CB-SB08玻璃纤维膜、吸水纸、PVC底板组装成试纸条。其中每垫金标垫上喷涂2×稀释的60μl金标抗体,检测线和质控线分别用Bio-dot XYZ3000金标点样仪喷涂0.5mg/ml的19-NT-OVA包被抗原和0.2mg/ml的羊抗兔IgG二抗。用试纸条检测19-NT标准溶液,检测限为180ng/ml,检测添加19-NT的猪尿样本时,检测限为200ng/ml,通过使用ImagJ软件对试纸条进行定量分析,可以得到的检测限为25ng/ml。本实验研究的试纸条优点是简便、快速,15min内就可以得到检测结果,适用于现场检测。本研究为19-NT胶体金试纸条的深入研究提供了重要的实验依据,也对食品中其它小分子兽药残留检测试纸条的研制提供了基础。