[中文摘要]目的:上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是恶性肿瘤启动侵袭和转移过程的一个关键步骤,由于EMT过程而导致的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）异质性也给基于上皮型抗原的CTCs检测技术的临床应用带来了挑战。虽然有证据表明基于EMT标志物的CTCs异质性与疾病进展相关,但在临床应用方面尚无统一的参考标准。本研究旨在评估基于EMT的不同CTCs亚型动态检测对转移性乳腺癌患者的预后价值。方法:本研究共计纳入108例参与前瞻性III期CAMELLIA研究的HER2阴性转移性乳腺癌患者,于治疗前及治疗过程中动态采集入组患者的外周血标本。本研究通过CanpatrolTM CTC检测系统,采用阴选法与多重RNA原位杂交相结合的方法对CTCs进行特异性基因核酸定位,将富集到CTCs分为上皮型、混合型和间质型三类。应用1年无进展生存（progression-free survival,PFS）率作为界值的受试者工作特性曲线（Receiver operating characteristic,ROC）分别寻找总CTC计数和间质型CTCs所占比例的最佳阈值,并采用Kaplan-Meier分析和Cox比例风险回归分析验证综合考虑CTC计数及间质型CTCs所占比例制定的诊断标准的预后价值。结果:本研究中以预测1年PFS率作为研究终点进行ROC曲线分析提示,总CTC计数的界值为9.500（曲线下面积[AUC]=0.538,95%可信区间为0.418-0.657）,间质型CTCs所占比例的界值为10.7%（AUC=0.581,95%可信区间为0.463-0.699）。进而制定兼顾CTCs计数以及异质性表型的标准,将同时满足总CTCs计数≥10个/5ml且间质型CTCs所占比例≥10.7%者定义为EMT组。生存分析显示,EMT组的无进展生存期较非EMT组明显缩短（中位6.2 vs 9.9个月,P=0.010）。根据兼顾CTCs计数以及异质性表型制定的联合标准和临床病理学特征建立PFS预测模型并描绘列线图,一致性指数为 0.613（95%CI:0.527-0.699,P=0.010）。结论:本研究兼顾CTC计数及上皮间质异质性制定了基于总CTC计数及间质型CTCs所占比例的联合标准,用于协助转移性乳腺癌一线化疗的预后评价及耐药监测。目的:循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）与免疫细胞的相互作用影响乳腺癌转移灶的播散和定植过程。尽管既往多项研究提示CTCs状态可以作为乳腺癌预后标志物之一,但发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的CTCs与免疫细胞的相互作用及其临床应用价值目前仍不明确。方法:本研究共纳入2013年11月至2017年9月期间参与前瞻性III期CAMELLIA研究的HER2阴性转移性乳腺癌患者134名,所有患者均接受多西他赛联合卡培他滨方案一线化疗。应用CanpatrolTM CTC检测系统对所有患者进行外周血CTCs富集,采用多重RNA原位杂交的方法对CTCs进行特异性基因核酸定位,将CTCs分为上皮型、间质型、混合型三种亚型,基于荧光信号及核型表现识别出循环肿瘤细胞相关白细胞团（CTC-associated white blood cell clusters,CTC-WBC 团）。应用Kaplan-Meier生存曲线评估CTC-WBC团与患者预后的关系。结果:研究中共纳入134名女性乳腺癌患者,中位年龄为51岁,其中119例（88.8%）为激素受体阳性的患者。患者的中位无进展生存期（progression-free survival,PFS）为9.9月（95%CI,8.1 to 11.6月）。其中116名患者（86.6%）在接受一线化疗前外周血中可检测到1个以上CTCs,9名患者可检测到CTC-WBC团,而7名患者可检测到混合型或间质型CTC-WBC团（即EMT样CTC-WBC团）。基线检测到EMT样CTC-WBC团的患者PFS较未检测到的患者明显缩短（7.2月vs 10.4月,P=0.028）。与基线检测到大于等于5个含上皮型成分的CTCs相比（即Cellsearch等基于上皮型标志物检测方法得到的CTC计数）,检测到EMT样CTC-WBC团的患者PFS也呈现明显缩短（7.2月vs11.4月,P=0.022）。结论:研究提示在接受一线化疗的HER2阴性转移性乳腺癌患者中,检测到经过上皮间质转化过程的CTC-WBC团的患者PFS明显缩短,可为临床提供简便易行的预后评价指标,也为晚期难治性乳腺癌的个体化治疗提供潜在靶点。目的:不同于传统的最大耐受剂量方案化疗,节拍化疗是通过相对低剂量、频繁的应用细胞毒性药物,使药物能够长时间维持在相对较低、但仍有抗肿瘤活性的血药浓度,同时减轻化疗的毒副作用。尽管既往多项基础研究和临床试验探索节拍化疗的分子机制及应用价值,但目前还没有证据阐述乳腺癌肠道菌群分布情况与不同剂量方案化疗的相关性。方法:这项探索性研究中共纳入31例于2017年11月-2019年2月期间就诊于国家癌症中心的接受多西他赛联合卡培他滨方案化疗后,被随机分组接受节拍剂量卡培他滨或常规剂量维持化疗的转移性乳腺癌患者。收集卡培他滨维持治疗阶段患者的粪便标本,通过16S rRNA基因测序分析患者肠道微生物组成、多样性及功能特征。同步构建接受节拍剂量和常规剂量卡培他滨给药的乳腺癌小鼠模型对不同剂量方案的肠道菌群分布差异进行验证。结果:研究纳入节拍化疗组患者15例,常规剂量组患者16例。节拍化疗组和常规剂量组之间的α多样性指数差异均未达到统计学显著意义。在β多样性分析中,节拍化疗组的Unweight-unifrac指数明显低于常规剂量组（P=0.025）。基于Bray-Curtis距离的冗余分析（dbRDA）表明,节拍化疗组和常规剂量组之间的微生物菌属可以部分分离。在乳腺癌小鼠模型中节拍剂量组与常规剂量组也表现出相似的菌群分布及多样性差异特征。节拍化疗组和常规剂量组的患者在优势菌门中微生物组成相似,但节拍组蓝细菌门（Cyanobacteria）的丰度较常规剂量组明显减少（P=0.029）。通过对节拍化疗组和常规剂量组的菌群KEGG功能代谢通路分析发现,节拍组肠道微生物在多种氨基酸代谢相关的九条通路富集增加,而常规组未见明显通路富集。接受卡培他滨治疗的晚期乳腺癌患者中,检测到sBlautia obeum菌的患者无进展生存期（progression-free survival,PFS）显著延长（32.7 个月 vs 12.9 个月,P=0.013）,而检测到Slackia的患者PFS显著缩短（9.2个月vs 32.7个月,P=0.004）。结论:研究提示接受卡培他滨节拍剂量化疗的乳腺癌患者肠道菌群在多样性、组成和功能上与常规剂量组存在差异,特定菌种的存在有可能作为耐药监测和预后评估的潜在生物标志物。