研究目的:无尾复合多肽伴侣蛋白（Chaperonin containing tailless complex polypeptide,CCT）在肿瘤的发生中起着重要的作用,但是具体的作用机制尚不明确。课题组前期工作中通过蛋白质质谱技术筛选出在白血病细胞株中显著上调的CCT的α亚基即TCP1,前期数据显示TCP1过表达在多种恶性肿瘤中预后不良,并且暗示了其影响肿瘤增殖和转移的能力。鉴于肝癌的高致死率并且TCP1在肝癌中的作用研究甚少,进一步研究TCP1对肝细胞癌增殖转移的影响及其相关的分子机制具有重要的科学意义。研究方法:（1）利用TCGA数据库,挖掘TCP1表达量和肝癌生存率的关系。（2）慢病毒包装、感染,构建稳定敲减TCP1的肝癌细胞株。分别通过观察细胞形态变化、克隆形成实验、Transwell小室实验研究敲减TCP1对肝癌细胞形态发生、克隆形成和迁移的影响。（3）肝癌细胞Huh7和SMMC-7721中分别敲减和过表达TCP1,Western blot检测对Erk/GSK-3β/Snail1通路的影响。Erk抑制剂Trametinib处理Huh7和SMMC-7721细胞,Western blot检测抑制Erk活性后对Erk/GSK-3β/Snail1通路的影响。（4）利用RT-q PCR检测敲减TCP1对Snail1 m RNA表达水平的影响,进一步检测Snail1上游转录因子P65的表达。（5）利用野生型和TCP1过表达转基因小鼠（TCP1-OE）,通过DEN诱导构建小鼠原发性肝癌模型,分别通过HE染色和免疫组织化学检测肝脏组织病理变化和肿瘤增殖情况,利用Western blot和RT-q PCR进一步在小鼠肝脏组织中验证体外实验的结果。（6）在野生型和TCP1过表达转基因小鼠中,利用鼠源性的肝癌细胞Hepa1-6/luciferase构建皮下移植瘤模型,小动物活体成像检测小鼠皮下移植瘤的生长。（7）利用SMMC-7721-sh V/luciferase和SMMC-7721-sh T/luciferase细胞,通过尾静脉注射构建裸鼠体内转移模型,小动物活体成像动态检测肝癌转移灶的形成,研究敲减TCP1对裸鼠肝癌细胞体内转移的影响。研究结果:（1）TCGA数据库分析,表明肝癌组织中TCP1表达量显著高于正常组,生存率下降。（2）敲减TCP1,Huh7和SMMC-7721细胞形态由间质型向上皮型转化,并且抑制细胞增殖、克隆形成和迁移。（3）肝癌细胞Huh7和SMMC-7721中敲减TCP1,能够下调Erk/GSK-3β/Snail1通路蛋白表达;过表达TCP1能够上调Erk/GSK-3β/Snail1通路蛋白表达。Erk抑制剂Trametinib处理后,P-Erk和Snail1表达下调。（4）敲减TCP1,能够下调P65蛋白表达和Snail1 m RNA水平表达。（5）在DEN诱导小鼠原发性肝癌模型中,与野生型相比,TCP1过表达小鼠HE染色结果显示肝脏组织病理特征明显;免疫组化结果显示,肿瘤增殖的相关分子Ki67,c-Myc表达量显著上调。Western blot和RT-q PCR结果显示,TCP1过表达小鼠能够上调Erk/GSK-3β/Snail1通路蛋白表达,并且P65蛋白表达和Snail1m RNA表达水平显著上调。（6）在Hepa1-6/luciferase细胞构建皮下移植瘤模型中,小动物活体成像结果显示,TCP1过表达小鼠生物发光信号强于野生型小鼠,两组之间生物发光信号差异较显著。（7）尾静脉转移模型结果显示,尾静脉注射肝癌细胞2-8 weeks内,对照组裸鼠生物发光信号随时间梯度不断增强,转移灶显著增多并且多分布于肺部而TCP1敲减组裸鼠几乎看不到信号,两组之间差异极显著,说明敲减TCP1能够抑制裸鼠体内肝癌转移灶的形成。进一步分析两组裸鼠存活率,我们发现TCP1敲减组裸鼠存活率较对照组显著提高,P<0.01,差异极显著,进一步证实敲减TCP1能够提高裸鼠体内肝癌转移存活率。结论:（1）TCGA数据库分析显示,肝癌组织中,TCP1高表达且表现为预后不良。（2）TCP1能够调控Huh7和SMMC-7721细胞增殖、迁移和EMT发生。（3）分别在细胞和动物模型水平,证实TCP1通过P65和Erk/GSK-3β/Snail1通路调控Snail1蛋白表达促进肝细胞癌的增殖。（4）TCP1能够促进Hepa1-6/luciferase细胞构建的皮下移植瘤生长。（5）敲减TCP1能够通过显著抑制裸鼠体内肝癌细胞的转移提高裸鼠存活率。