【摘 要】
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古菌中包含有Forkhead (FHA)结构域的转录因子的功能和靶调控基因目前尚很不清楚。极端嗜热古菌Sulfolobus tokodaii str.7中ST0829蛋白C端含有FHA结构域,是丝苏氨酸蛋白激酶
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古菌中包含有Forkhead (FHA)结构域的转录因子的功能和靶调控基因目前尚很不清楚。极端嗜热古菌Sulfolobus tokodaii str.7中ST0829蛋白C端含有FHA结构域,是丝苏氨酸蛋白激酶ST1565蛋白磷酸化反应底物,N端含有Zn finger-RanBP结构域,通常可以结合DNA序列。因此,ST0829是一个潜在的转录因子。本课题通过构建S. tokodaii str.7启动子文库,运用细菌单杂交技术等方法,筛选和验证转录因子ST0829调控的下游靶基因,并进一步研究磷酸化作用对于古菌转录调控的影响,主要取得了以下几个方面的结果：(1)构建完成了S. tokodaii str.7启动子文库。(2)利用细菌单杂交筛选S. tokodaiistr.7启动子文库,发现了含有FHA结构域的ST0829蛋白调控的下游靶基因—古菌鞭毛蛋白操纵子(FlaG, FlaF, FlaH, FlaI, FlaJ)。(3)通过体外EMSA、SPR实验,体内CHIP实验验证了ST0829蛋白可以特异性结合这个鞭毛蛋白操纵子启动子序列(ST2519p)。(4)发现了ST0829蛋白被ST1565蛋白磷酸化之后,DNA结合活性显著降低。(5)ST0829蛋白能够与RNA聚合酶β亚基相互作用,并具有转录自调控现象。本研究首次鉴定了古菌FHA蛋白转录因子调控的下游靶基因,并通过体内体外实验验证了这种特异性的相互作用,进一步发现了磷酸化在转录方面的调控作用。这些工作对于我们深入理解古菌适应极端环境的机制提供了线索。
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