3D打印磷酸镁/聚已内酯原位组织再生支架的构建及体内外成骨性能研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbhhl2006
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:口腔颌面部骨性结构的完整性对完成正常咀嚼、言语和呈现面部的美学特征等功能有着极其重要的影响。原位组织再生修复在骨及软骨组织修复领域应用广泛,该技术是将支架直接植入到体内缺损部位,利用支架材料固有的生物学活性和诱导分化能力来招募体内细胞的迁移、增殖和分化来实现缺损组织的修复。为了实现上述原位组织工程修复支架的功能,最常用的策略是在支架材料中添加生物响应性分子,通过生物响应性分子的刺激来实现组织的愈合和再生。目前针对颌面部骨缺损支架材料的热门研究主要集中在:如何通过相关技术将不同的生物材料相结合来制备高性能并快速成型的复合材料,使得新材料能够克服以往材料的缺陷,更好的适应体内微环境,对损伤部位起到良好的修复作用。PCL支架已被广泛应用于骨组织工程中,其具有很好的生物相容性、可降解性、可加工性和力学性能,但是单纯的PCL支架也存在一些缺点如生物活性差、亲水性能不佳以及成骨诱导能力弱,这些问题限制了它在生物医学领域的应用。3D打印骨修复支架能够根据患者需求个性化定制不同外观尺寸的支架以满足不同缺损位置的需求。在3D生物打印方法中FDM生物打印技术制备的生物可降解高分子支架可以作为骨组织工程支架,但存在其表面光滑、阻碍细胞有效附着等缺点,需要改进这些缺点。本研究选择Mg3(PO4)2与PCL熔融共混,利用FDM生物打印技术制备具有生物响应性的新型原位组织工程支架。制备不同配比Mg3(PO4)2/PCL支架材料,对理化表征、机械性能及降解性能分析,研究支架结构和Mg3(PO4)2含量对支架性能的影响。通过体外及大鼠骨缺损模型的体内实验,分析新型支架材料的生物相容性及骨缺损修复性能。选取最佳成骨性能配比的Mg3(PO4)2/PCL支架材料,在兔下颌骨骨缺损模型内验证支架在颌骨骨缺损修复中的成骨性能。研究方法:1、将Mg3(PO4)2和PCL以5:95、10:90和20:80(W/W)的比例混合制备支架做为实验组,以PCL支架作为空白对照组,FDM生物打印机打印支架。2、SEM对四组支架的形貌特征进行观察,获得四组支架材料的孔隙结构和微观形貌,采用Imge J(1.48V)软件计算Mg3(PO4)2在支架上的表面积比。3、接触角实验测定支架的亲水性。4、傅里叶红外光谱(FITR)、X射线衍射(XRD)和热重分析(TGA)对不同组别支架材料进行组成成分测定。5、支架的剪切黏度与机械力学测试。6、检测四组支架的降解性能和Mg2+的释放谱。7、四组支架的PH值测定。8、将MC3T3-E1细胞与支架在三维培养装置中培养,通过活死细胞染色、CCK-8实验和扫描电镜来评价支架的细胞黏附与增殖能力。9、将支架浸入模拟体液连续30天,SEM观察支架表面形态并对Ca元素进行EDS元素扫描分析,评价不同组支架的矿化能力。10、使用细胞三维培养装置将MC3T3-E1细胞接种在支架表面,通过ALP染色、ALP活性检测以及ARS染色,评价支架的体外促成骨分化能力。11、建立大鼠胫骨骨缺损模型,将四组支架植入大鼠胫骨骨缺损模型内,影像学及组织学检测体内生物相容性和促成骨性能。12、建立兔下颌骨骨缺损模型,选取最佳成骨性能配比的Mg3(PO4)2/PCL支架材料作为实验组,PCL支架作为对照组,并设立空白对照组,支架植入后8周影像学检测成骨性能。13、实验数据统计学分析。结果:1、Micro-CT三维重建图像显示实验组支架具有规则的多孔结构,纤维和孔隙大小均匀。SEM图像显示,Mg3(PO4)2颗粒在支架中的分布均匀,支架的纤维直径在330.45±25.19μm之间,支架呈现多孔结构,水平孔为方形,侧长为410.83±18.38μm,支架层间孔隙为矩形,高度为89.32±3.28μm。2、随着Mg3(PO4)2含量的增加,接触角逐渐减小,PCL、PCL#5MgP、PCL#10MgP和PCL#20MgP四组支架的接触角分别为122.55±5.35°、113.86±2.53°、106.6±7.77°和95.54±3.20°。3、FTIR、XRD和TGA实验结果表明,Mg3(PO4)2被成功加载到PCL支架上,随着Mg3(PO4)2含量的增加,支架的剪切黏度也增加。4、Mg3(PO4)2含量的逐渐增加,可以显著提升支架的抗压强度,但抗拉强度有所降低。5、支架可以缓慢降解并逐渐释放Mg2+,pH值在7.25-7.5之间。6、细胞在支架上的黏附与增殖实验表明Mg3(PO4)2/PCL支架无毒性,与对照组相比,实验组的细胞黏附能力增强,细胞分布均匀形态良好,细胞增殖活跃。7、支架的孔隙结构和Mg3(PO4)2的加入后PCL支架的矿化能力有所提升。8、实验组Mg3(PO4)2加入可以提升MC3T3-E1细胞的ALP活性和钙沉积能力,PCL#20MgP支架组体外促成骨分化性能最佳。9、Mg3(PO4)2/PCL支架在大鼠胫骨骨缺损模型实验中的影像学与组织学检测结果显示,随着Mg3(PO4)2含量的增加,支架的促成骨分化性能逐渐增强,PCL#20MgP支架组的体内成骨效果最明显。10、兔下颌骨骨缺损模型实验结果证实,PCL#20MgP支架组对兔颌面部骨缺损的修复效果明显优于PCL组和空白对照组。结论:1、利用FDM生物3D打印技术成功制备了新型Mg3(PO4)2/PCL原位组织修复支架材料,支架具有良好的孔隙结构,随着支架内Mg3(PO4)2含量的增加,支架的抗压强度增加,亲水性增强且pH值稳定,支架可以缓慢降解并释放Mg2+。2、体外实验表明支架的孔隙结构与Mg3(PO4)2加入,对PCL支架的细胞黏附与增殖能力、矿化能力和促成骨分化性能有很好的的促进作用。大鼠胫骨骨缺损模型体内成骨实验也证实,四组支架中PCL#20MgP支架的促成骨分化性能最佳,与体外实验结果一致。3、利用PCL#20MgP支架修复兔下颌骨骨缺损,结果证实PCL#20MgP在颌骨骨缺损修复中具有良好的成骨性能,其可以作为颌面部骨缺损修复材料的新选择。
其他文献
目的:本研究拟从hippo通路效应因子WWTR1入手,通过生信分析预测其上游调控的miRNA和circRNA,通过分析胃癌患者癌组织及配对正常胃粘膜组织中WWTR1、miRNA和circRNA表达的差异及三者之间的相关性,提出并验证“胃癌中存在circRNA/miRNA/WWTR1调控轴”假设,通过细胞学实验验证轴调控功能,同时分析此轴下游效应因子与胃癌病理生物学行为及患者生存的关联。研究方法:1
学位
为了解贫燃预混燃气轮机燃烧室掺氢燃烧的性能变化及潜在风险,以西门子SGT-800型燃气轮机燃烧室为对象开展了天然气掺氢燃烧过程的数值模拟研究,考察了0%、5%、10%、15%、30%(体积分数,下同)5种掺氢比例工况下燃烧室内的燃料着火、温度分布、火焰形态以及NOx排放特性。研究表明:在当前燃烧室内开展掺氢燃烧,将导致燃料着火位置提前、温度峰值提高、火焰轴向长度变短,同时外侧值班火焰逐渐向中心混合
期刊
背景:心房颤动(Atrial fibrillation,AF)是临床上最常见的心律失常,而阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是常见的老年性痴呆的一种,有研究显示,AF和AD均作为年龄依赖性疾病,具有相似的遗传和生化特征,以及共同的触发因素,但具体机制仍不清楚。β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的形成是AD主流的病理假说,在AD患者的心脏和大脑中,都可能发现淀粉样蛋白。特发性扩张型
学位
目的:胰腺癌(Pancreatic cancer,PC)有“癌中之王”的称谓,而高转移性及由此导致的高致死率是其恶性表型和不良预后的突出特征。研究和发现与PC肿瘤细胞早期转移相关的新型靶基因、明确其作用的相关分子生物学机制十分必要。KAI1基因作为已获证实的肿瘤抑癌基因之一,具有明确抑制PC肿瘤细胞迁徙和远端转移作用。溶血磷脂酸(Lysophosphatidic Acid,LPA)是一种多功能的“
学位
目的:时间窗内重组组织纤溶酶原激活物(recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA)溶栓及机械取栓是目前最有效的脑梗死急性期治疗方案,但即使在时间窗内进行溶栓或机械取栓治疗也不能确保患者获得良好预后,其中一个重要原因是血管再通后伴随的缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)导致血脑屏障(blood brain
学位
报纸
目的:大量流行病学研究发现,牙周炎是阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)的危险因素之一。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)作为重要的牙周致病菌,其在AD疾病进程中的作用及相关机制是目前的研究热点。P.gingivalis重要毒力因子牙龈蛋白酶在大脑海马体神经元内沉积,与AD疾病进程密切相关。研究发现,牙周炎影响系统性
学位
目的:全科医师是落实我国分级诊疗制度和实现健康中国战略的重要人才保障。我国已经初步建立了符合中国特色的全科医师培养体系,其中全科住院医师规范化培训是其中最重要部分。基本医疗服务能力是全科医师需要具备的核心能力之一,但目前尚缺乏专门针对全科住院医师基本医疗服务能力考核指标体系的研究。本研究旨在运用综合研究方法,构建一套符合中国国情和适用性较好的全科住院医师基本医疗服务能力考核指标体系及考核方案。研究
学位
目的:牙周炎(periodontitis)是由牙菌斑生物膜引起的牙周组织慢性感染性疾病,牙周炎症引起牙槽骨的吸收,牙周袋形成及牙齿松动脱落,是成人丧失牙齿的主要原因。牙菌斑生物膜是牙周炎的始动因素,其中革兰阴性厌氧菌在牙周炎中发挥重要作用,牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)是牙周炎主要的优势菌之一,是目前公认的牙周重要致病菌。P.gingivalis通过多种机制干扰
学位
目的:牙周炎是以菌斑生物膜为始动因子发生在牙周支持组织的慢性感染性疾病。口腔上皮作为抵御病原体入侵牙周组织的第一道防线,口腔上皮细胞连接发挥重要核心作用。在牙周炎症状态下,牙周致病菌可通过破坏上皮细胞连接侵入牙龈及深层组织。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)作为关键牙周致病菌,通过多种途径破坏上皮连接,侵入上皮屏障,加剧牙周组织破坏。因此,
学位