硫化氢在脂多糖致PMVECs通透性增高中保护作用的研究

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目的:通过检测PMVECs活性及VE-cad的表达水平,探讨不同浓度的外源性H2S在LPS致PMVECs通透性增高中的作用。方法:1.采用组织贴块法原代培养大鼠PMVECs。免疫荧光、免疫组化鉴定细胞。2.DMEM/F-12培养液中加入不同浓度(1μg/mL、4μg/mL、7μg/mL、10μg/mL)的LPS作用24h。MTT法选取LPS所致的PMVECs通透性增高的最佳作用浓度。3.实验随机分为空白对照组、LPS组、LPS+NaHS 50μmol/L组、LPS+NaHS 100μmol/L组、LPS+NaHS 200μmol/L组,每组5个复孔。空白对照组:DMEM/F-12培养液;LPS组:浓度7μg/ml的LPS;LPS+NaHS 50μmol/L组:LPS(7μg/mL)+NaHS(50μmol/L);LPS+NaHS 100μmol/L组:LPS(7μg/mL)+NaHS(100μmol/L);LPS+NaHS 200μmol/L组:LPS(7μg/mL)+NaHS(200μmol/L)。在给予LPS 24h后,MTT法检测各组PMVECs的活力,免疫组化技术检测各组细胞中VE-cad的表达水平。4.应用SPSS19.0、Image-Pro Plus图像分析技术分别对免疫组化图片资料和计量资料进行统计学分析。结果:1.细胞形态学的结果:原代培养的PMVECs呈典型的铺路石样生长。传代后的细胞形态与原代略有不同,呈长梭状。2.细胞鉴定的结果:试剂与PMVECs胞浆结合,分别呈现绿色荧光和棕褐色颗粒,VIII抗体和vWF抗体表达阳性。3.MTT法选取LPS作用浓度的结果:浓度为7μg/mL的LPS作用24h后,细胞生长明显受到抑制。故本实验初步选定LPS的浓度为7μg/mL诱导PMVECs通透性增高。4.不同浓度NaHS干预后的细胞活性的结果:与空白对照组相比,LPS组中的细胞活性显著降低(P<0.05)。而LPS+NaHS 50μmol/L组、LPS+NaHS 100μmol/L组、LPS+NaHS 200μmol/L组中的细胞活性较LPS组呈剂量依赖性升高,且差值具有统计学意义(P<0.05)。5.NaHS干预后VE-cad表达的结果:与空白对照组相比,LPS组中VE-cad表达量明显降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+NaHS50μmol/L组、LPS+NaHS 100μmol/L组、LPS+NaHS 200μmol/L组中VE-cad的表达量均有升高。同时,各NaHS组组间比较亦具有统计学差异,显示升高是呈剂量依赖性的(P<0.05)。6.相关性分析的结果:PMVECs活性与细胞中VE-cad表达量的相关分析显示二者呈明显正相关关系(P<0.001)。结论:1.LPS可以诱导PMVECs中VE-cad表达下调,建立PMVECs通透性增高的模型。2.H2S参与LPS性PMVECs损伤及通透性增加的调节,改善LPS性PMVECs损伤。通过上调VE-cad的表达,降低LPS性PMVECs通透性增高。
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