【摘 要】
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花生四烯酸可通过PGH合成酶亦称为环氧化酶作用转化为PGH.环氧化酶是前列腺素合成途径中重要的酶.该酶与正常生理活动及病毒活动如：炎症、AD、肿瘤都有密切关系.环氧化酶有两
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花生四烯酸可通过PGH合成酶亦称为环氧化酶作用转化为PGH<,2>.环氧化酶是前列腺素合成途径中重要的酶.该酶与正常生理活动及病毒活动如：炎症、AD、肿瘤都有密切关系.环氧化酶有两种异构酶,称为组成型表达的环氧化酶Ⅰ（COX-1）和诱导型表达的环氧化酶Ⅱ（COX-2）.两种酶都能被传统的非甾体类抗炎药（NSAIDs）所抑制.该论文工作是建立一种COX-2抑制剂的体外筛选方法,初步建立了两种方法：1根据某些细胞（如：NIH 3T3）在诱导条件下能瞬时表达COX-2的性质,诱导细胞进行表达COX-2,加入底物花生四烯酸,产生前列腺素,通过测定终产物浓度来判断化合物对酶活的影响,进行化合物的体外筛选.2利用RT-PCR技术从细胞中分离出COX-2基因,经过测序,将序列与报道序列比较,确定为COX-2基因后,连接到真核表达载体pcDNA3.1中,构建表达载体pcDNA3.1/Cox-2,利用脂质体介导方法转染HEK293细胞进行表达,筛选稳定表达细胞系,测定COX-2活性,结果在转染了pcDNA3.1/Cox-2的细胞上清中PGE<,2>浓度较高,而且经Rofecoxib处理后,PGE<,2>浓度下降,判断该方法可以用于COX-2抑制剂的筛选.
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