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目的：
通过向原代培养的大鼠动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中转染早期反应生长因子-1(early growth response fator,Egr-1)特异性诱骗寡核苷酸(decoy oligonucleotides,decoy ODN)和杂码寡核苷酸(oligonuleotides SCR),检测Egr-1、巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigration inhibitory factor,MIF)mRNA和蛋白表达变化,以及血管平滑肌迁移情况,探讨Egr-1和MIF关系以及二者对体外平滑肌细胞迁移的影响。
方法：
通过组织块贴壁法原代培养大鼠动脉血管平滑肌细胞,并通过非脂质体携带针对Egr-1的诱骗寡核苷酸进行细胞转染,用RT-PCR、S-P免疫细胞化学染色法检测不同时间点Egr-1和MIF表达情况,进行MetaMorphan图像分析。同时利用划伤愈复法检测VSMC迁移能力。所有数据均采用SPSS11.5进行统计分析,计量资料以均值±标准差表示,各组间比较应用单因素方差分析,p＜0.05有统计学意义。
结果：
成功进行原代VSMC培养,经细胞形态学及S-P免疫组化鉴定培养细胞为高纯度的VMSC。RT-PCR结果显示:Egr-1诱骗寡核苷酸转然后,Egr-1 mRNA表达随着时间逐渐减少;MIF mRNA表达在48h达到高峰。同一时间点,诱骗组Egr-1及MIF mRNA表达均显著减少,与对照组、SCR组相比较有统计学意义(p＜0.05)。S-P法免疫组化结果显示:对照组及SCR组VSMC Egr-1、MIF蛋白均有表达,两组之间无明显差异(p＞0.05),Egr-1诱骗组Egr-1、MIF蛋白表达显著低于上述两组,且均有统计学意义(p＜0.05)。同时细胞划伤愈复法结果显示:与对照组姐SCR组比较,诱骗组中VSMC的迁移距离明显减少(p＜0.05)。
结论：
本实验证实了Egr-1可以促进VSMC迁移,在血管再狭窄中可能有重要作用。在体外培养的血管平滑肌细胞中转染Egr-1特异性诱骗寡核酸能明显下调Egr-1的转录表达,同时MIF的表达受到抑制,进而血管平滑肌细胞迁移能力减弱,提示我们Egr-1与MIF之间可能存在正相关性。Egr-1特异性诱骗寡核苷酸能通过调控Egr-1/MIF途径抑制VSMC迁移速度,提示这种基因治疗方法在治疗血管后再狭窄中有广阔的应用前景。