SSR分子标记在杂交水稻品种纯度鉴定中的应用研究

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本研究以内5优8015、Y两优689、II优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种为试验材料,每个品种种子均分别来至上海、江西、海南、广西、江苏等5个制种基地,探讨SSR分子标记在杂交水稻品种纯度快速鉴定中的应用,主要结论如下:1.通过对水稻种子DNA快速提取方法的改进,优化原有提取方法中的关键步骤,确定不同杂交水稻品种种子的最佳DNA快速提取方法:8个品种种子提取液最佳浸泡时间不同,内5优8015、II优7954、钱优1号、浙优12、浙优18等5个品种种子的最佳浸泡时间均为12h,但Y两优689、株两优06、春优84等3个品种种子需20h。此外,8个杂交稻品种种子提取物第一步离心均以15min为最佳条件。2.对原有PCR扩增体系进行优化,确定各品种纯度检测的最优PCR扩增体系(10μl)。内5优8015、II优7954、钱优1号、浙优12、浙优18等5个品种的PCR反应体系:Mix5μl,DNA1μl,Forward primer0.25μl,Reverse primer0.25μl,H2O3.5μl;Y两优689、株两优06、春优84等3个品种纯度检测的PCR反应体系:Mix5μl,DNA1.5μl,Forward primer0.25μl,Reverse primer0.25μl,H2O3μl。3.根据国家水稻品种鉴定DNA指纹方法推荐的24对SSR引物分别对内5优8015、Y两优689、II优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种DNA进行PCR扩增,筛选出每个品种特异性条带最明显、整体效果最佳的引物作为标准图谱的构建。通过对这8个杂交稻品种种子进行SSR分子标记纯度鉴定,结果如下:内5优8015、Y两优689、II优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种的平均纯度分别是96.3%、97.6%、96.3%、96.1%、96.9%、98.6%、98.2%、97.1%。4.以上8个杂交稻品种分别在上海、江西、海南、广西、江苏进行田间小区鉴定,在植株幼苗期至成熟期,通过对植株的典型性状进行观察,将各品种中的异(杂)株区分,田间纯度鉴定结果如下:内5优8015、Y两优689、II优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种平均纯度分别是97.7%、98.4%、98.3%、97.7%、98.0%、98.9%、99.0%、98.0%。5.通过优化种子DNA提取方法和PCR反应体系,对以上8个杂交稻品种种子纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间检验结果进行比较发现,SSR分子标记纯度鉴定结果略低于田间鉴定结果,表明分子标记更易区分异(杂)种子,田间小区鉴定难以区分相似的异(杂)株。统计分析结果表明:SSR分子标记纯度鉴定结果与田间检验结果无显著差异。因此,SSR分子标记鉴定方法可用于杂交稻品种纯度的快速鉴定,为企业尽快了解种子质量状况,促进优质种子提早上市具有重要意义。
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