树突状细胞(dendritic cell,DC)对抗原的内吞并结合于主要组织相容性复合物(Major histocompatibility complexes,MHC)分子是T细胞活化和免疫应答的前提和基础。DC对抗原的摄取包括经吞噬、巨胞饮或受体介导的内吞作用而实现。网格蛋白(clathrin)介导的内吞包括受体的内吞作用,如Fc受体(FcR)、转铁蛋白受体(transferrin receptor,TR)、DEC205(CD205)、DC-SIGN及甘露糖受体(Mannose receptor,MR)[1]。MR对体外DC摄取可溶性抗原如鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)介导交叉提呈是必需的[2]。早期内体是MR摄取可溶性的抗原进入细胞后的关键器室,Rab5是早期内体上的标志性分子。MR结合FcRγ链,这是MR在细胞膜上定位以及抗原进入细胞所必须的[3]。实验室研究发现,尼古丁可以通过PI3K/AKT途径上调DC表面MR的表达,而增强抗原内吞及抗原内体转位[4]。为研究甘露糖受体介导的交叉提呈的抗原进入内体的机制。本研究以小鼠单核巨噬细胞(Raw264.7)和小鼠骨髓来源的树突状细胞为细胞模型,以OVA为抗原模型,运用Western Blot方法检测抗原负载对细胞信号通路的激活情况;其次以流式细胞术检测PI3K/AKT抑制剂wortmannin处理对Raw264.7和树突状细胞的吞噬抗原能力及定位的影响;再次以网格蛋白免疫共沉淀和免疫荧光技术检测网格蛋白活性调控后网格蛋白与MR、信号激酶AKT、早期内体标志分子Rab5及抗原的相互作用情况,发现AKT活性调节抗原吞噬及网格蛋白了参与甘露糖受体介导的抗原向内体转位中的作用。结果表明:首先,OVA抗原负载可激活PI3K/AKT、Rac1、Cb1;其次,PI3K/AKT抑制剂wortmannin可影响抗原进入细胞,且与早期内体标志性分子Rab5有共定位;接着,网格蛋白免疫共沉淀显示,Rab5、OVA和MR与网格蛋白有相互作用,提示网格蛋白可能参与了MR受体介导的OVA向早期内体的转位。最后,clathrin siRNA转染能抑制OVA向细胞转位,并且调节网格蛋白、MR与早期内体标志性蛋白Rab5的共定位。提示MR与OVA以及网格蛋白形成复合物进入内体,并受网格蛋白所调控。