家蚕中球孢白僵菌结合蛋白CI7A的鉴定

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球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种昆虫致病性真菌,由于其具有高效低毒,宿主范围广的特点,现已被作为生物杀虫剂广泛应用。球孢白僵菌对昆虫的侵染主要是利用发芽管分泌的表皮降解酶和机械压力穿透昆虫的表皮,进入宿主体腔分泌蛋白酶和毒素,吸取宿主营养,最终导致昆虫死亡。昆虫与真菌协同进化,形成了先天性免疫体系来抵御真菌的侵染。当微生物侵染昆虫时,昆虫能通过Toll和Imd信号途径产生不同的抗菌肽对其进行抑杀。此外,昆虫通过前酚氧化酶级联系统产生的黑色素,体液免疫产生的抗真菌蛋白以及细胞免疫等对真菌也具有防卫作用。虽然家蚕(Bombyx mori)基因组框架序列在2004年已被测定,极大地推动了家蚕先天性免疫方面的研究,但是家蚕抵御真菌方面的研究仍然较少。   本研究将家蚕幼虫体液蛋白和球孢白僵菌分生孢子一起孵育,对家蚕体液中存在的能与球孢白僵菌相结合的蛋白进行了MALDI-TOF-MS质谱鉴定,获得了四个球孢白僵菌结合蛋白,其中β-1,3-葡聚糖识别蛋白,脂蛋白30K(6G1)和抗菌肽attacin三种蛋白是已知的能与真菌相互作用的蛋白。随后对首次鉴定得到的真菌结合蛋白CI8A进行了较为深入的研究。首先原核表达并纯化了CI8A融合蛋白,制备了CI8A抗体。通过调查CI8A在被球孢白僵菌诱导后mRNA和蛋白质水平的变化,发现CI8A的mRNA转录本诱导后上调,而蛋白质水平上基本没有变化。此外,采用Western blotting手段证明了CI8A不仅能与球孢白僵菌结合,而且能与真菌细胞壁的主要成分(几丁质,葡聚糖和纤维素)结合,暗示了CI8A蛋白可能在免疫应答中起着模式识别因子的功能。最后,通过发芽率测定的结果表明,CI8A融合蛋白对真菌的生长有较弱的抑制作用。  
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