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目的和意义:随着外科手术技术的成熟、器官保存技术的提高、新型免疫抑制剂的发展和围手术期监护的改进,肝移植的成功率稳步提高,至上世纪末供肝存活率已超过80%。但是,肝移植术后胆道并发症发生率高达10%～34%,严重影响肝移植受者生存时间及生活质量。本实验在建立大鼠自体原位肝移植模型的基础上,探讨低氧预适应(hypoxic preconditioning, HP)对移植肝肝内胆管上皮细胞的保护作用及VEGF在其中的作用,从而为临床实践提供参考,减轻肝移植术后胆道并发症,提高肝移植术后的生存质量和生存率。方法:SD大鼠,随机分为3组,A组:自体原位肝移植组(n=50);B组:低氧预适应自体原位肝移植组(n=50),大鼠术前24h给予气体流量5L/min的8%氮氧混合气体(含氧气8%,其余为氮气)处理90min; C组:正常对照组(n=8)。A、B组大鼠均在术后6h、12h、24h、48h各取8只处死,经心脏采血作血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、碱性磷酸酶(ALP)检测。免疫组织化学法检测胆管上皮细胞VEGF的表达及其核增殖指数(PI);光镜下观察胆管上皮细胞的显微结构,透射电镜下观察肝内毛细胆管的超微结构。结果:(1)大鼠手术成功的标准:大鼠即刻苏醒、翻身,并能维持有效的呼吸、心跳。A组和B组有效大鼠例数各为50例,无肝期控制为(20±2.3)min。(2)血清TBIL、DBIL、ALP的情况:与C组比较,A、B两组术后各时相点TBIL、DBIL、ALP都有不同程度的升高,差异明显(p<0.05);但B组与A组相比较,A组各时相点升高更加显著(p<0.05),其中术后24h达到峰值。(3) VEGF的表达情况及胆管上皮细胞的PI:各组胆管上皮细胞均有VEGF的表达,与假手术组比较,A、B两组各时相点表达更强,差异显著(P<0.05),而B组与A组相比,B组各时相点表达更强,差异显著(P<0.05),其中术后12h VEGF的表达达到峰值;与假手术组相比,A组、B组的胆管上皮细胞都有不同程度的增生(P<0.05),但B组各时相点的胆管上皮细胞PI升高更明显(P<0.05)。(4)胆管上皮细胞的显微结构:正常对照组肝内胆管上皮细胞在光镜下呈柱状,排列整齐;细胞核位于基底部,无炎症细胞浸润,管腔内无或少有脱落坏死的上皮细胞。A组术后6h可见胆管上皮细胞排列紊乱,形态多样,周围开始出现炎症细胞浸润,到术后24h细胞损伤最为显著,管腔内可见坏死脱落的细胞碎片。而B组各时相点胆管上皮细胞损伤程度均较A组明显减轻。(5)肝内毛细胆管超微结构变化:A组各时相点与B组相比,肝内毛细胆管管腔扩张明显,微绒毛肿胀、数量减少或消失的情况严重,胆汁淤积程度明显。结论:低氧预处理对移植肝肝内胆管上皮细胞具有保护作用,可能与其能够诱导移植肝肝内胆管上皮细胞过度表达VEGF有关,。