新生儿败血症(neonatal sepsis)发病隐匿,临床症状无特异性,存活者有相当一部分发生后遗症。因此,寻找快速、敏感而特异的新生儿败血症早期诊断指标,对指导临床治疗、降低新生儿死亡率、改善预后,具有十分重要的意义。在本研究中,我们分析细菌16S rRNA基因序列,在其保守区设计引物和探针,进行荧光定量PCR与基因芯片杂交分析,最终建立了细菌16S rRNA基因荧光定量PCR与基因芯片杂交相结合的方法快速检测细菌DNA,并对临床标本进行检测取得良好效果。本研究分二部分:第一部分,16S rRNA基因荧光定量PCR—基因芯片杂交技术的建立;第二部分,16S rRNA基因荧光定量PCR—基因芯片杂交技术的临床应用研究。 第一部分 16S rRNA基因荧光定量PCR—基因芯片杂交技术的建立 方法:在细菌的16S rRNA基因保守区域设计通用引物,并在该引物的扩增的区域内设定一条通川荧光探针。对阳性标准菌株组、阴性对照组进行荧光定量PCR检测、分析。同时在细菌16rRNA基因保守区设计引物,设置区分革兰氏阴性菌、阳性菌与其他特异性菌属的探针,制成基因芯片,通过对标准菌株、阴性对照组进行芯片荧光杂交、洗脱、扫描,最后进行分析。