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目的:通过建立SD大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,研究穗花杉双黄酮对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:1.采用微波辅助提取法(Microwave-assisted extraction,MAE)提取石上柏;提取物通过D101大孔树脂、硅胶柱、Sephadex LH-20层析柱分离得到穗花杉双黄酮(Amentoflavone,AME);利用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatograhy,HPLC)检测AME的纯度,采用核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)等技术对AME的结构进行鉴定。2.建立SD大鼠心肌缺血/再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)损伤模型,探讨AME大鼠I/R的保护作用。将60只SD大鼠随机分为6组(n=10):(1)假手术(Sham)组、(2)模型(I/R)组、(3)地尔硫?(Diltiazem,DIZ)组、(4)I/R+AME 25 mg/kg组、(5)I/R+AME 50 mg/kg组、(6)I/R+AME 100 mg/kg组。连续给药7d后,通过结扎冠状动脉建立I/R模型,全程监测大鼠心电图ST段的变化,再分别取腹主动脉血液和大鼠心脏。通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(Thermal Transfer Composites,TTC)染色法检测大鼠心肌梗死体积;采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining,HE)染色观察心肌组织病理变化;通过原位末端转移酶标记技术(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;乳酸脱氢酶(Lumber disc herniation,LDH)释放法检测大鼠血清中LDH的水平变化;ELISA法检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、白介素(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平变化;蛋白印迹(Western blot)法检测PI3K/AKT-NF-κB信号通路中相关蛋白水平的表达。结果:1.石上柏中AME的制备。通过MAE提取得到石上柏提取物147.21 g;经D101大孔树脂、硅胶柱、Sephadex LH-20层析柱分离纯化得到AME 3.23 g,纯度为96.2%。2.AME对大鼠I/R的影响。实验结果表明,AME可显著降低大鼠心肌梗死体积和心肌细胞凋亡水平,同时还可降低大鼠血清中心肌酶(LDH、CK-MB)水平及相关炎性指标IL-1β、IL-6及TNF-α的水平。此外,与I/R组相比,AME处理后不仅可以提高AKT的磷酸化,还呈剂量依赖性地抑制了NF-κB的磷酸化。结论:实验结果显示:AME对冠状动脉结扎诱导大鼠I/R损伤具有较好的保护作用。其作用机制之一为AME通过调控PI3K/AKT-NF-κB信号通路,提高AKT的磷酸化及抑制NF-κB的磷酸化,减少心肌细胞调亡,降低相关炎性因子的释放,从而改善I/R后心室重塑及心肌组织病变。本研究结果为临床上应用AME防治I/R提供了新的依据及理论支持。