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目的:利用pGCSIL-GFP/GTPBP4-RNAi慢病毒载体转染人结肠癌细胞HT29,沉默GTPBP4基因,探究GTPBP4 RNAi对HT29细胞生物学行为的影响。方法:1.慢病毒最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）的筛选及细胞转染慢病毒GTPBP4 RNAi载体及阴性对照慢病毒载体由上海吉凯基因公司包装完成;预实验用慢病毒转染人HT29细胞筛选出最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）,用筛选出的最佳MOI进行正式转染实验。将处于对数生长期的HT29细胞分为实验组和阴性对照组,于转染前一天铺板,转染细胞72h后荧光显微镜下观察GFP标记所激发出的荧光丰度,以此初步判断细胞转染效率。2.Real-time PCR及Western blot技术检测转染慢病毒后GTPBP4基因mRNA和蛋白水平的沉默效率（1）慢病毒转染细胞72h后,分别提取实验组和对照组HT29细胞总RNA,根据Takara公司逆转录试剂盒说明书合成cDNA,采用Real-time PCR检测GTPBP4基因mRNA表达水平;（2）慢病毒转染细胞72h后,分别提取实验组及阴性对照组总蛋白,采用Western blot检测GTPBP4蛋白表达水平。经蛋白变性、上样、电泳、电转、化学发光,得到蛋白条带并分析基因的沉默效率;3.慢病毒沉默GTPBP4基因对HT29细胞生物学行为的影响（1）CCK-8法检测沉默GTPBP4基因后,HT29细胞在体外增殖能力的改变:分别于细胞转染后分板的24h、48h、72h、96h四个时间点,检测实验组和阴性对照组两组细胞在体外的增殖能力。（2）平板克隆形成实验检测慢病毒转染细胞沉默GTPBP4基因后单个细胞体外成瘤能力的变化。（3）划痕实验检测GTPBP4基因沉默后,对结肠癌细胞HT29体外迁移能力产生的影响。（4）Transwell实验检测GTPBP4基因沉默对结肠癌细胞HT29体外侵袭能力的影响。（5）PI-FACS法检测沉默GTPBP4基因对结肠癌细胞HT29增殖周期分布的影响。（6）AnnexinV-APC单染法检测GTPBP4基因沉默后,两组细胞凋亡率的差别。4.慢病毒沉默GTPBP4基因对p53和Survivin蛋白表达量及定位的影响利用Western blot和免疫荧光技术,检测慢病毒转染人结肠癌细胞HT29沉默GTPBP4基因对p53和Survivin蛋白表达量及定位的影响。结果:1.MOI的筛选GTPBP4 RNAi转染人结肠癌细胞HT29的MOI值为10.2.慢病毒转染HT29细胞后,GTPBP4基因mRNA水平和蛋白表达水平显著降低。（1）采用2-ΔΔCt法统计实验组和阴性对照组中GTPBP4基因mRNA表达水平。结果显示:实验组GTPBP4 mRNA相对表达量为0.026±0.01,阴性对照组GTPBP4 mRNA相对表达量为0.993±0.06,且两组间差异具统计学意义（P<0.05）,故GTPBP4 RNAi能够有效地抑制mRNA的表达。（2）Western blot结果:在内参蛋白条带灰度基本一致的条件下,实验组GTPBP4蛋白条带灰度明显低于阴性对照组。3.慢病毒沉默GTPBP4基因对HT29细胞生物学行为的影响（1）CCK-8结果:在转染后分板的24h、48h、72h、96h,实验组测得的OD值均值分别为0.77±0.01、1.06±0.02、1.64±0.02、2.01±0.06,阴性对照组OD值均值分别为0.92±0.03、1.34±0.04、2.27±0.02、3.17±0.09,实验组OD值小于对照组,且两组间差异具统计学意义（P<0.05）。实验组较阴性对照组细胞增殖指数显著降低。（2）平板克隆形成实验:种板2周后,实验组生成细胞集落个数均数为67.00±3.61,对照组生成细胞集落个数均数为115.70±10.02,实验组细胞集落个数明显少于阴性对照组,且两组间差异具统计学意义（P<0.05）。（3）划痕实验:在划痕48h后,实验组融合平均距离为500.01±1.82PX（像素）,阴性对照组融合平均距离为781.23±10.51 PX（像素）,实验融合距离明显小于阴性对照组。（4）Transwell实验:细胞接种的48h,固定染色后,实验组穿过Matrigel胶的细胞数目均数为91.40±4.39,阴性对照组穿过Matrigel胶细胞数目均数为263.80±11.90,实验组细胞数目明显小于阴性对照组,且两组间差异具有统计学意义（P<0.05）。（5）细胞周期结果:与阴性对照组相比,实验组处于G1的细胞数目比例显著增加,而处于S期细胞数目明显减少。（6）细胞凋亡结果:实验组的细胞凋亡比例明显高于阴性对照组。4.慢病毒沉默GTPBP4基因对p53和Survivin蛋白表达量及定位的影响在目的基因GTPBP4沉默的条件下,p53蛋白表达明显上调,而Survivin蛋白表达明显下调;荧光显微镜下观察发现,实验组与阴性对照组的p53,Survivin蛋白均在核表达,并没有发生表达位置的改变。结论:1.pGCSIL-GFP/GTPBP4-RNAi慢病毒载体能够感染人结肠癌HT29细胞,并且有效沉默GTPBP4基因。2.HT29细胞GTPBP4基因沉默后,细胞增殖活性受到抑制、克隆形成能力、体外迁移侵袭能力降低,细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。3.GTPBP4在结直肠癌发生发展中可能作为癌基因发挥作用。4.GTPBP4基因可能通过调节p53、Survivin蛋白表达在结直肠癌发生发展过程中扮演重要角色。