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乌骨藤具有消炎、清热解毒、止咳平喘、散结止痛等功效,其制剂对食管癌、胃癌、肺癌等多种癌均具有确切疗效。研究表明,乌骨藤皂苷具有一定抗肿瘤活性。课题运用现代方法,对乌骨藤中皂苷类成进行了提取分离和结构鉴定,对皂苷单体和总皂苷提取物进行体外抗肿瘤活性评价等一系列研究。
综合运用溶剂法和柱色谱、半制备高效液相色谱等手段对乌骨藤皂苷类成分进行分离,运用UV、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、Hsoc、HMBC等数据进行结构鉴定,从中分离鉴定了3个化合物,分别为牛奶菜醇、乌骨藤皂苷元B、乌骨藤苷B,其中化合物乌骨藤皂苷元B为首次从该植物中分离得到。
采用MTT比色法对乌骨藤苷元B和乌骨藤苷B两个皂苷单体进行了HepG2、SMMC-7721、MCG-803、BGC-823、A549、NCI-H460、Eca-109、CaEs-17等八种细胞株抗肿瘤活性的筛选研究,结果表明,乌骨藤苷元B和乌骨藤苷B均具有明显的抗肿瘤作用。采用比色法为对不同产地乌骨藤饮片中总皂苷进行了含量分析比较研究,结果表明,不同产地饮片中总皂苷含量差异较大。
以总皂苷含量和出膏率为指标,对乌骨藤皂苷提取方法、提取溶媒等进行比较,采用正交试验法对乌骨藤总皂苷进行了提取工艺研究,确定最佳提取工艺为:18倍量75%乙醇提取2次,每次1.5小时。采用单因素和正交试验相结合的方法对乌骨藤总皂苷进行了大孔树脂纯化工艺研究,优选出总皂苷精制工艺为:0.5g生药/ml上D101树脂2bv/h流速吸附,树脂床F:L为1:8,洗脱的最佳条件为:5倍于湿树脂重量的75%乙醇,2bv/h进行洗脱。并对优选的工艺参数进行了中试放大验证,可过渡到产业化生产。
采用MTT比色法对乌骨藤总皂苷提取物进行了HepG2、SMMC-7721、MCG-803、BGC-823、A549、NCI-H460、Eca-109、CaEs-17等八种细胞株抗肿瘤活性的筛选研究,结果表明,乌骨藤总皂苷具有明显的抗肿瘤作用。
采用HPLC和UV,建立乌骨藤总皂苷提取物中苷B和总皂苷的含量测定方法,经方法学考察显示符合含量测定的技术要求。
课题研究为乌骨藤皂苷抗肿瘤活性及临床应用提供科学理论依据。