论文部分内容阅读
目的：比较壳寡糖对人肝细胞(Chang Liver)和人肝癌细胞(SMMC-7721)凋亡诱导作用的影响,并初步探讨其分子机制,以期为临床开发低毒副作用的抗肝癌新药提供实验依据。方法：MTT法检测不同浓度的壳寡糖作用不同时间后,肝细胞与肝癌细胞的增殖抑制率；Hoechst 33258荧光染色法观察壳寡糖作用后,肝细胞与肝癌细胞的形态变化；流式细胞仪检测壳寡糖作用后,对肝细胞与肝癌细胞凋亡率的影响；Western blotting检测壳寡糖作用后,肝细胞与肝癌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2.Caspase-3表达的变化。结果：1)0.5-2.5 mg/ml的壳寡糖分别作用24 h、48 h后,肝癌细胞的增殖受到不同程度的抑制,并且存在剂量依赖效应,半数抑制浓度(50％concentration of inhibition,IC50)为2.5 mg/ml,而对肝细胞的增殖无明显抑制;3.0-4.0 mg/ml的壳寡糖分别作用24 h、48 h,对肝细胞和肝癌细胞的增殖均有抑制作用,但对肝癌细胞的抑制率明显大于肝细胞。2)2.5 mg/ml的壳寡糖作用24 h后,肝癌细胞发生明显的凋亡,肝细胞无显著变化。3)2.5 mg/ml的壳寡糖作用24 h后,肝癌细胞的凋亡率显著上升至76.04%,而肝细胞的凋亡率无明显变化。4)2.5 mg/ml的壳寡糖作用24 h后,肝癌细胞中Bcl-2的表达量明显减少,Caspase-3的表达量明显增加；而肝细胞中两种蛋白的表达量均无明显变化。结论：壳寡糖对人肝细胞(Chang Liver)和人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖抑制作用存在显著差异,低浓度的壳寡糖对肝癌细胞有明显的增殖抑制作用,而对肝细胞的增殖无明显抑制。壳寡糖对肝细胞和肝癌细胞的凋亡诱导作用存在明显差异,低浓度的壳寡糖对肝细胞无明显的促凋亡作用,但能够明显促进肝癌细胞的凋亡,并且与下调抑凋亡蛋白Bcl-2和上调促凋亡蛋白Caspase-3的表达有关。壳寡糖对肝细胞与肝癌细胞的凋亡诱导作用表现出了细胞选择性,这可能与细胞和壳寡糖相互作用的方式及结构有关。本文在壳寡糖对人肝细胞(Chang Liver)和人肝癌细胞(SMMC-7721)凋亡诱导作用上进行了比较,并初步探讨了其分子机制,为临床开发低毒高效的抗肝癌新药提供了实验依据与参考。