【摘 要】
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本文旨在探讨RNA干扰HIF-1α基因对肉鸡肺动脉内皮细胞（Pulmonary artery endothelial cell,PAECs）生长及增殖的影响。以10-18日龄AA肉鸡为试验动物,体外培养肉鸡原代PAECs,建立细胞缺氧模型,构建RNA干扰慢病毒载体-重组质粒,在不同时间（12h、24h、48h）,不同组别（正常组（NC组）,空载组（UP组）,慢病毒干扰HIF-1α组（HRNAi组）
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO. 31402266,31960723）; 江西省自然科学基金（NO. 20171ACB21026）; 江西现代农业家禽产业技术体系（JXARS）
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本文旨在探讨RNA干扰HIF-1α基因对肉鸡肺动脉内皮细胞（Pulmonary artery endothelial cell,PAECs）生长及增殖的影响。以10-18日龄AA肉鸡为试验动物,体外培养肉鸡原代PAECs,建立细胞缺氧模型,构建RNA干扰慢病毒载体-重组质粒,在不同时间（12h、24h、48h）,不同组别（正常组（NC组）,空载组（UP组）,慢病毒干扰HIF-1α组（HRNAi组）,缺氧组（NC-A组）,空载缺氧（UP-A）,慢病毒干扰HIF-1α缺氧组（HRNAi-A组））,转染PAECs实现HIF-1α基因的敲低表达效果。利用细胞形态观察、细胞凋亡、免疫荧光鉴定、HIF-1α、VEGF的基因和蛋白表达水平检测以及RNA-Seq检测,来验证HIF-1α基因的RNA干扰效果。试验结果如下:1、成功构建HIF-1α干扰慢病毒LV416＿PDS019-PL-sh RNA-GFP-gas-HIF-1α-535（HIF-1α-535）,得到慢病毒原液滴度达3×10~8 TU/m L,经验证干扰效果佳。2、缺氧对PAECs具有促进增殖、诱导凋亡的作用,且HIF-1α、VEGF基因表达水平呈显著上升;HIF-1α干扰则抑制增殖,促进凋亡,HIF-1α、VEGF基因表达水平呈显著下降。3、与NC组相比,HRNAi组共有1070个差异表达基因,其中235个为表达上调,835个为表达下调;NC-A组则分别有131个和215个分别表达上调和下调;与NC-A组相比,HRNAi-A组有371个上调基因,642个下调基因;与HRNAi组相比,则有107个上调基因,237个下调基因。结合GO数据库与KEGG通路数据库富集分析显示CAMs、ECM、MAPK等通路显著调控,这些通路是与细胞增殖与凋亡密切相关。结论:缺氧能够诱导肉鸡PAECs的增殖与凋亡,HIF-1α干扰能够使肉鸡PAECs的增殖水平下降、凋亡水平上升,可引起COL4A等基因的下调及ITGα8、MKP5等基因的上调,调控CAMs、ECM、MAPK等通路变化。这些结果为肺动脉重构机制提供了一定依据,也为肉鸡腹水综合征基因药物筛选奠定了基础。
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