目的：肝纤维化(hepatic fibrosis)是多种慢性肝病的共同病理基础,是临床向肝硬化发展的必经环节。目前研究认为肝纤维化属于可逆性病变。肝纤维化的主要特征是肝脏内细胞外基质(ECM)的生成和降解的失衡,调节ECM合成、降解的一个重要环节是基质金属蛋白酶-基质金属蛋白酶抑制因子(MMPs-TIMPs)系统,其中间质胶原酶MMP-1(人)/MMP-13(鼠)及其基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)为最重要平衡因子。在正常肝脏中,MMP-1(人),MMP-13(鼠)与TIMP-1维持着平衡统一的状态,一旦两者作用失衡,TIMP-1的作用增强,将过度抑制MMP-1(人)/MMP-13(鼠)对肝脏内细胞外基质(ECM)的降解作用,使ECM沉积增多,从而促进肝纤维化的发生发展。国内外学者一致认为：肝纤维化过程中TIMP-1表达增高,抑制了MMPs的活性,可促进肝纤维化的发展,因此抑制TIMP-1的表达也是阻止肝纤维化发生、发展的重要环节。 本研究旨在前期研究的基础上,应用RT-PCR及western bloting技术检测大鼠肝组织内TIMP-1、MMP-13 mRNA及蛋白的表达,在RNA及蛋白水平研究反义TIMP-1真核表达质粒是否在肝纤维化过程中竞争抑制TIMP-1的高表达,在mRNA水平封闭肝脏内TIMP-1的过高表达,从而释放胶原酶(鼠MMP-13,人MMP-1)的活性,促进ECM的降解,进而达到逆转肝纤维化的目的,探讨基因治疗肝纤维化的可行性及有效性,为肝纤维化的基因治疗提供理论依据。 材料与方法：取-80℃低温保存的前期实验大鼠肝脏,正常对照组12例,肝纤维化组11例、空质粒组10例、反义TIMP-1真核表达质粒干预组11例。运用RT-PCR、western blot半定量检测肝组织内TIMP-1mRNA、MMP-13 mRNA及蛋白的表达。 结果：正常对照组、反义TIMP-1质粒组、空质粒组、肝纤维化组中TIMP-1mRNA及蛋白表达量分别为2.068±0.408、3.630±0.551、5.603±0.867、5.71±0.612,0.429±0.138、0.516±0.085、0.953±0.100、0.983±0.068。各组中MMP-13mRNA及蛋白表达量分别为0.864±0.461、0.855±0.288、0.486±0.250、0.477±0.371,1.603±0.526、1.545±0.525、0.832±0.426、0.813±0.313。各组TIMP-1mRNA及蛋白的表达：空质粒组与肝纤维化组间无显著性差异(P>0.05),其余各组间比较均有统计学意义(P<0.05)。反义TIMP-1质粒组TIMP-1mRNA及蛋白的表达较空质粒组、肝纤维化组明显下降,较正常对照组则有升高。空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05)。MMP-13 mRNA及蛋白表达,反义TIMP-1质粒组与正常对照组间,空质粒组与肝纤维化组间无显著性差异(P>0.05),余各组间均有显著性差异(P<0.05)。 结论： 1.反义TIMP-1/pcDNA3.1(+)真核细胞表达质粒能够抑制肝脏中TIMP-1 mRNA及蛋白的表达,在一定程度上减轻TIMP-1对MMP-13活性的抑制作用； 2.反义TIMP-1/pcDNA3.1(+)真核细胞表达质粒对肝纤维化过程中MMP-13的表达起间接的抑制作用,可以使肝纤维化的发展受到抑制； 3.反义TIMP-1表达质粒可以在肝纤维化过程中竞争抑制TIMP-1的高表达,在mRNA水平封闭肝脏内TIMP-1的过高表达,从而释放胶原酶(鼠MMP-13)的活性,促进ECM的降解,阻止并逆转肝纤维化的发展,为今后临床肝纤维化的基因治疗提供理论依据。