前言美索巴莫是一种中枢性肌肉松弛剂，临床上用于治疗关节肌肉扭伤、腰肌劳损、坐骨神经痛等病症，也可用于增生性脊柱炎、风湿性关节炎、类风湿性关节炎的治疗。美索巴莫的疗效与剂量关系很大，只有在血液中的浓度达到并维持在一定水平，才能有效发挥作用。美索巴莫的疗效也取决于给药时间，及时给药疗效较好。在现代药物代谢与药物动力学研究中，常用的体内药物分析方法有很多种，高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）适用范围广，分离效率高，组分易回收，同时随着检测技术的不断更新和发展，使其成为现今最常用的检测手段。本研究根据分子有共轭双键结构在紫外区有吸收的特点，建立了用高效液相色谱-紫外法（HPLC-UV）测定人血浆美索巴莫浓度的方法。以丹东市通远药业有限公司生产的美索巴莫胶囊为受试制剂（tested formulation，T），上海长征富民药业华中有限公司生产的高笑红坐骨胶囊（美索巴莫胶囊）为参比制剂（reference formulation，R），分别测定18名健康受试者口服受试制剂和参比制剂后血浆美索巴莫的浓度，绘制了血药浓度.时间曲线。根据血药浓度-时间数据，采用梯形法计算曲线下面积（area under the curve，AUC）值；以半对数作图法，由消除相末端的浓度点计算半衰期(half life，t_1／2)；求出主要的药动学参数和受试制剂的相对生物利用度；将所得的主要药动学参数进行统计分析，评价生物等效性。为美索巴莫的安全、合理用药提供科学的试验依据。材料与方法1、检测方法的确证（1）色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.05mol／L磷酸二氢钾缓冲液（pH 4.6）-甲醇（69：31，v／v）；流速：1.0 ml／min；紫外检测波长：274nm：柱温：室温。（2）方法学考察方法专属性；制备标准曲线；精密度试验；提取（绝对）回收率试验；准确度试验：样品稳定性试验（短期室温稳定性、长期低温稳定性和冷冻.解冻稳定性）。2、试验方案选择健康男性志愿受试者18名。受试者年龄和体重相近。受试者无既往病史和药物过敏史，精神状态良好，平时很少服药，不吸烟，无嗜酒，试验前两周内（14天内）未服用任何药物。试验前在中国医大附属一院接受全面体格检查。于试验前让受试者了解试验目的、试验药物的主要作用、可能发生的不良反应和受试者的权益等，签署知情同意书。试验采用标准的双处理、双周期、两序列2×2交叉设计。将18名健康男性受试者随机分为两组，每组9人，自身交叉服用受试制剂和参比制剂。即一组先口服受试制剂，再口服参比制剂，另一组先口服参比制剂再口服受试制剂。两组交叉服药间隔7天清洗期。于试验前一日晚21：00开始禁食，试验当日晨7：00空腹口服750mg美索巴莫受试制剂或参比制剂，以250ml温开水送服。4小时和9小时后进同样饮食。于口服给药后0、0.33、0.67、1.0、1.33、1.67、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、9.0和12.0小时分别从前臂正中静脉抽血5.0ml，并立即移入经肝素抗凝干燥的离心管中，静置5min后，经3000rpm离心10min，分离血浆，于-20℃冰箱中保存待测。3、血药浓度测定将受试者待测血浆样品自冰箱中取出，自然融化后取血浆200μl，依次加入20μg／ml的环丙沙星内标溶液25μl，蛋白沉淀剂10％三氯醋酸溶液120μl，涡旋1min，静置30min，于10，000 rpm离心10min，吸取全部上清液经0.22μm滤膜过滤。取滤液50μl进样到HPLC系统，进行血浆样品美索巴莫浓度的测定。4、数据处理将血药浓度-时间数据资料输入计算机，采用中国药理学会编制的3P97实用药代动力学程序软件进行统计分析，进行药代动力学参数、相对生物利用度的估算和生物等效性评价。实验结果1、检测方法选用的检测波长为274nm。内标环丙沙星和美索巴莫峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳。环丙沙星保留时间（retention time，t_R）为5.5min，美索巴莫保留时间为9.4min。美索巴莫与环丙沙星能得到良好分离。美索巴莫在0.2～20.0μg／ml范围，线性关系良好。方法的精密度良好，血浆提取（绝对）回收率达到80％以上，相对回收率为102.68～116.27％，符合生物样品测定要求。美索巴莫样品溶液在室温放置24小时稳定，-20℃保存30天稳定，经过3个冷冻.解冻循环后稳定。2、受试对象18名受试者平均年龄为22.4±0.8岁，体重75.2±3.5kg，身高178.1±3.4cm，身高体重指数23.7±0.6kg／m²。受试者血、尿常规及心电图检查正常，血压和血液生化学指标检查结果均无异常。3、受试者服用受试制剂和参比制剂后血浆美索巴莫浓度4、血药浓度-时间曲线5、药动学参数及相对生物利用度的估算采用3P97实用药代动力学程序软件进行统计分析，求出药代动力学参数。根据美索巴莫受试制剂和参比制剂的AUC_0→t计算相对生物利用度。受试者口服750mg美索巴莫受试制剂和参比制剂后，血浆中美索巴莫的T_max分别为0.80±0.23h和0.85±0.23h，C_max分别为14.34±2.99μg／ml和13.26±2.84μg／ml，t_1／2分别为1.84±0.62h和1.96±0.68h。用梯形法计算，AUC_0→t分别为33.97±8.36μg·h／ml和32.66±10.19μg·h／ml，AUC_0→t分别为35.13±8.72μg·h／ml和33.83±10.00μg·h／ml。以AUC_0→t计算，美索巴莫胶囊的相对生物利用度F_0-t为106.0±12.2％。6、生物等效性评价将主要药代动力学参数对数转换后进行方差分析，结果显示，美索巴莫两种制剂的AUC_0→t、AUC_0→∞、C_max和T_max均无显著性差异（P＞0.05），进一步采用双单侧t检验和（1-2α）％置信区间分析，AUC_0→t和C_max均无显著性差异（P＞0.05），受试制剂AUC_0→t的90％置信区间为参比制剂相应参数的100.4～110.4％，C_max的90％置信区间为参比制剂相应参数的100.9～116.2％，统计分析结果表明两种制剂在人体内具有生物等效性。结论（1）本研究建立了一种测定人血浆美索巴莫浓度的HPLC-UV法。该方法测定血浆美索巴莫浓度专属性强，灵敏度高，准确性好。该方法具有操作简便、成本低、精密度和回收率高等特点，可广泛用于化学药物分析和生物等效性的研究。（2）测定了18名健康志愿者口服美索巴莫参比制剂和受试制剂后的血药浓度，经过药动学参数分析，发现美索巴莫受试制剂和参比制剂生物等效。研究结果提示丹东市通远药业有限公司生产的美索巴莫胶囊和已上市的上海长征富民药业华中有限公司生产的高笑红坐骨胶囊体内代谢相似，受试制剂——美索巴莫胶囊可在临床上安全有效地使用。