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目的:1、本研究用人重组炎性因子刺激人口腔黏膜上皮细胞(hOMEC),体外建立炎症模型,观察不同炎性因子对hOMEC人β-防御素(human Beta-defensins,hBDs)和Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)表达的影响。2、通过Toll样受体抑制剂作用于炎性因子刺激后的hOMEC,检测hBD-2、hBD-3表达的改变,探讨在hOMEC上炎性因子刺激hBD-2、hBD-3分泌的分子机制。3、观察地塞米松对于口腔黏膜上皮防御素表达的影响并探讨Toll样受体相关信号通路调控机制。方法:1、将从临床取材的唇裂儿童多余的唇内侧黏膜采用改良式组织块法培养原代口腔粘膜上皮细胞。用50ng/ml终浓度的人重组TNF-α、IFN-γ、IL-17A分别刺激或两两组合刺激第二代hOMEC,24小时后采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中TLR2、TLR4、hBD-2、hBD-3 mRNA的相对表达量。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中hBD-2和hBD-3的蛋白水平。2、选用50ng/ml(TNF-α+IFN-γ)诱导第二代人口腔黏膜上皮细胞24h为模型组,另设实验组TLR2抑制剂anti-mTLR2-IgG孵育细胞2h后,再用50ng/ml(TNF-α+IFN-γ)刺激细胞24h,RT-PCR检测细胞hBD-2、hBD-3的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中hBD-2蛋白水平。3、选用不同浓度的Dex(0.1,1,10μM)预处理第二代hOMEC12h后,再用50ng/ml(TNF-α+IFN-γ)刺激细胞24h,RT-PCR检测细胞TLR2、hBD-2、hBD-3的mRNA相对表达量,取贴壁细胞,提取细胞总蛋白行Western Blot(WB)检测TLR2蛋白的表达情况。ELISA检测细胞上清液中hBD-2蛋白水平。结果:1、TNF-α组hBD-2的mRNA相对表达量、IL-17组的hBD-2mRNA和蛋白及hBD-3的mRNA相对表达量均高于与空白对照组(P<0.05),TNF-α+IFN-γ组、TNF-α+IL-17组、IFN-γ+IL-17组的hBD-2的mRNA和蛋白及hBD-3 mRNA相对表达量均高于相应细胞因子单独干预组。TLR2的mRNA水平在TNF-α组和TNF-α+IFN-γ组显著升高(P<0.05),其余处理组差异无统计学意义。TLR4的mRNA水平在各处理组之间有所升高,但差异均无统计学意义(P>0.05)2、TLR2抑制剂预处理hOMEC2h后,炎性因子刺激引起的hBD-2、hBD-3的mRNA表达增强被明显抑制(P<0.05),hBD-2的蛋白表达水平与mRNA水平趋势一致。3、不同浓度Dex均能使TNF-α+IFN-γ诱导的hOMEChBD-2的mRNA相对表达量下降,且随Dex浓度增加而降低,在浓度为10μM时,差异有统计学意义(P<0.05)。在hBD-2蛋白水平,不同浓度Dex均能使hBD-2表达量下降(P<0.05),且不同浓度的Dex作用下,hBD-2表达量之间差异无明显统计学意义(P>0.05)。而在任何浓度的Dex作用下,h BD-3的mRNA相对表达量与模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α+IFN-γ能使TLR2的mRNA相对表达量明显升高,在Dex浓度为0.1,1μM时TLR2的mRNA水平有轻微升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。0.1,1,10μM的Dex均能使TLR2的蛋白表达量下降,且低浓度的Dex下调TLR2的蛋白表达量最明显。结论:TNF-α与IFN-γ可能通过激活TLR2信号通路诱导hOMEC hBD-2mRNA和蛋白及hBD-3mRNA表达升高。其中,hBD-2的诱导表达的可被Dex通过TLR2信号通路所抑制。