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研究背景:糖尿病心脏自主神经病变（Diabetic cardiac autonomic neuropathy,DCAN）是一种相对常见且通常具有破坏性的糖尿病并发症,严重影响身体健康。星状神经节发出的交感神经纤维参与构成支配心脏活动的神经丛,可以调节心脏、血管的活动。星状交感神经节神经元的胞体被卫星胶质细胞（Satellite glial cells,SGCs）包围着,糖尿病环境下SGCs被大量激活,细胞间缝隙连接蛋白也会增多,增强传递伤害性信息,从而促进神经细胞释放三磷酸腺苷（ATP）,进一步激活P2嘌呤能受体。P2X7受体受ATP特异性激活,其作为一种离子通道,可以使细胞内多种信号得到激活,从而释放促炎细胞因子。铁死亡是一种新发现的不同于其他细胞死亡方式的新的死亡方式,主要由脂质过氧化物的累积和过量铁离子积累引起。近年来有文献表明,糖尿病及其并发症的病理机制中存在着铁死亡。金丝桃素具有抗炎,抗肿瘤,保护心血管和保护神经等作用。有文献表明金丝桃素可以通过抑制一些炎症因子的升高来缓解糖尿病。但金丝桃素是否通过P2X7受体缓解糖尿病自主神经病变未见报道。本文通过建立DCAN模型,研究糖尿病心脏自主神经病变是否由P2X7受体介导,金丝桃素是否可以通过抑制升高的P2X7受体缓解铁死亡,从而缓解糖尿病心脏自主神经病变的表现。目的:1、探究糖尿病心脏自主神经病变过程是否有P2X7受体的介导。2、探究金丝桃素是否可以通过抑制升高的P2X7受体缓解铁死亡从而缓解糖尿病心脏自主神经病变。方法:高糖高脂喂养加小剂量链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型,糖尿病心脏自主神经病变模型是否建模成功需要在2型糖尿病大鼠模型的基础上检测心率变异性、血压、心率来判断。将大鼠随机分为:正常对照组（Control）、模型组（DCAN）、模型加P2X7敲低处理组（DCAN+P2X7 shRNA）、模型加乱码空载质粒阴性对照组（DCAN+NC shRNA）、模型加金丝桃素处理组（DCAN+HYP）、模型加铁死亡抑制剂处理组（DCAN+Fer-1）、模型加溶剂组（DCAN+DMSO）,P2X7过表达处理组（Control+P2X7 OE）,空载质粒组（Vector）。实验内容:（1）测量各组大鼠心率血压,交感神经放电,心率变异性变化,HE染色观察各组心肌组织损伤情况;（2）酶联免疫吸附剂测定（ELISA）各组大鼠血清中心肌损伤相关酶学指标如心肌肌钙蛋白I（cTnI）、乳酸脱氢酶（LDH）等的含量;（3）试剂盒检测各组SG中谷胱甘肽（GSH）、活性氧（ROS）、组织铁（Fe）、丙二醛（MDA）含量;（4）免疫荧光双标实验观察各组大鼠星状神经节中P2X7受体与GFAP共表达的情况;（5）q RT-PCR、免疫蛋白印迹来测定各组大鼠转铁蛋白受体1（TFR-1）、铁蛋白重链1（FTH-1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白表达量和mRNA表达量;（6）免疫蛋白印迹检测促炎细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）表达量和Cx43蛋白的蛋白表达量;结果:（1）DCAN组大鼠的心率和血压均明显高于Control组（p＜0.01）,颈交感放电频率和幅度较Control组均明显升高（p＜0.01）,心率变异性较Control组降低,HE染色观察心脏组织切片,和Control组相对比,DCAN组心肌组织纤维排列不整齐,心肌细胞变形膨大;DCAN+P2X7 shRNA、DCAN+Fer-1组、DCAN+HYP组的大鼠心率和血压较DCAN组均明显降低（p＜0.01）,颈交感放电频率和幅度也明显降低（p＜0.01）,HE染色观察到的心肌组织纤维排列不整齐,心肌细胞变形膨大的情况得到了好转,空载质粒组和溶剂组与DCAN组相比没有明显差异（p＞0.05）;和Control组对比,P2X7过表达处理组的心率加快、血压升高（p＜0.05）,颈交感神经放电频率和幅度均明显升高（p＜0.01）,心率变异性降低;HE染色观察心脏组织切片,可以看到P2X7 OE组和Control组对比出现了心肌纤维排列紊乱,心肌细胞肥大的情况,正常组和空载体组相比无明显差异（p＞0.05）。（2）DCAN组大鼠的血清CK、CK-MB、LDH、cTn-I含量均明显高于Control组（p＜0.01）;与DCAN组相比,DCAN+P2X7 shRNA、DCAN+Fer-1组、DCAN+HYP组的大鼠血清cTn-I、CKMB、CK、LDH含量均降低（p＜0.01）;空载质粒组和溶剂组与DCAN组相比没有明显差异（p＞0.05）;和Control组对比,P2X7 OE组的血清CK-MB、CK、CI、LDH均升高（p＜0.01）,正常组和空载体组相比无明显差异（p＞0.05）。（3）与正常组相比,DCAN组大鼠的星状神经节中GSH水平明显降低（p＜0.01）,MDA、ROS以及组织铁含量均明显升高（p＜0.01）;与DCAN组相比,DCAN+P2X7 shRNA、DCAN+Fer-1组、DCAN+HYP组的星状神经节中GSH水平明显增加（p＜0.01）,ROS、MDA和组织铁含量均降低（p＜0.01）,正常组和空载体组相比无明显差异（p＞0.05）;（4）P2X7受体与GFAP共定位,P2X7受体于大鼠SG的卫星胶质细胞上表达,DCAN组较Control组大鼠SG中P2X7受体和GFAP共表达水平显著上升（p＜0.01）;较DCAN组,DCAN+P2X7 shRNA处理组的P2X7受体和GFAP共表达水平明显降低（p＜0.01）。（5）DCAN组的TFR-1蛋白表达量较Control组显著增加（p＜0.01）,GPX-4、FTH-1蛋白表达量较Control组显著减少（p＜0.01）;DCAN+P2X7shRNA、DCAN+Fer-1组、DCAN+HYP组较DCAN组的TFR-1蛋白水平均明显降低,GPX-4和FTH-1的蛋白水平明显升高（p＜0.01）,DCAN+NC shRNA组和DCAN+DMSO组与DCAN组均无明显差异（p＞0.05）。（6）DCAN组的IL-1β、TNF-α和Cx43蛋白表达量和Control组对比显著增加（p＜0.01）;与DCAN组相比,DCAN+P2X7 shRNA、DCAN+HYP组的IL-1β、TNF-α蛋白表达量明显降低（p＜0.01）,正常组和空载体组相比无明显差异（p＞0.05）。结论:星状神经节P2X7受体参与糖尿病心脏自主神经病变,DCAN存在铁死亡;下调P2X7受体可以抑制铁死亡并改善DCAN,金丝桃素可与P2X7受体结合并降低其表达。金丝桃素可能通过抑制P2X7受体进一步抑制铁死亡从而缓解糖尿病心脏自主神经病变。