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研究背景:自新型冠状病毒肺炎-19（Novel coronavirus pneumonia-19,COVID-19）爆发以来,全球抑郁症发生率增高。“快感缺失”是抑郁症的核心症状,而伏隔核（Nucleus accumens,NAc）作为奖赏环路的信号调节中转站,可维持和调节快感动机。海马（Hippocampus,HIPP）是记忆相关脑区,HIPP向NAc脑区的信号输入可驱动NAc活动,HIPP对NAc的信号投射在目标导向行为的调节中发挥作用,它们的活动强度可能对情境奖励行为至关重要。此外,抑郁症的发生会破坏γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）能系统的功能,而代谢型GABAB受体（GABABreceptor,GABABR）对抑郁症的发生发展影响机制尚不明确。研究目的:在前期体内实验的基础上,我们欲构建皮质酮（Corticosterone,CORT）诱导的HIPP和NAc原代神经元体外抑郁模型,探究在CORT诱导的HIPP和NAc原代神经元抑郁模型中,细胞膜GABABR的表达及其相关机制,并确定其为主要作用靶点,为抑郁症临床治疗提供新思路和理论依据。研究方法:1.构建CORT诱导的抑郁细胞模型（1）HIPP和NAc原代神经元的培养和鉴定。根据HIPP和NAc脑图谱位置和形状提取原代神经元并培养到14d,用免疫荧光（Immunofluorescence,IF）实验进行神经元类型鉴定。（2）选定合适的CORT处理浓度和时间。用不同浓度的CORT（50μM/100μM/200μM）处理不同的时间（24h/48h）,通过细胞计数试剂盒-8（Cell counting kit-8,CCK-8）检测CORT处理后的细胞活力,选定细胞活力约50%的处理浓度和时间。（3）建立CORT诱导的体外抑郁模型。用CORT诱导HIPP和NAc原代神经元,建立体外抑郁症模型。在原代HIPP和NAc原代神经元中转染绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）标签空载质粒,CORT诱导后观察HIPP和NAc原代神经元的树突棘数量变化。2.探索CORT诱导神经元过程中GABABR细胞膜表达及其作用（1）在CORT诱导细胞抑郁模型中,通过免疫印迹实验（Western blotting,WB）结合细胞膜蛋白提取试剂盒和IF等实验观察,HIPP和NAc神经元膜GABABR表达,明确CORT诱导的细胞抑郁模型中细胞膜GABABR的表达变化。（2）在上述实验基础上,使用GABABR激动剂巴氯芬（Baclofen）,采用CCK-8实验技术检测细胞活力,采用WB、IF等实验技术观察GABABR的膜表达。3.CORT诱导神经元GABABR细胞膜表达的分子机制（1）在CORT细胞抑郁模型中,采用Fluo 4荧光探针技术检测Ca2+的内流;采用WB结合细胞膜提取试剂盒和IF实验,检测细胞膜Ca MKIIα表达。（2）在CORT细胞抑郁模型中,采用免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）实验检测p-Ca MKII-GABAB1R的相互作用和GABAB1R的磷酸化水平。（3）在上述实验基础上,联合使用Baclofen,采用Fluo 4荧光探针技术、WB结合细胞膜提取试剂盒和IF等实验技术,检测Ca2+内流和Ca MKIIα的表达,采用Co-IP实验技术检测p-Ca MKII-GABAB1R的相互作用和GABAB1R的磷酸化水平。研究结果1.HIPP原代神经元有90%以上是兴奋性神经元,NAc原代神经元有90%以上是GABA能神经元;100μM CORT处理48h会导致HIPP和NAc原代神经元的细胞活力降低到50%左右;CORT减少HIPP原代神经元树突棘数量。2.CORT降低HIPP和NAc原代神经元GABABR细胞膜表达,使用Baclofen后恢复HIPP和NAc原代神经元细胞活力和GABABR细胞膜表达。3.CORT减少HIPP和NAc原代神经元GABABR细胞膜表达与增加细胞内Ca2+浓度,Ca MKIIα的表达,增加p-Ca MKII-GABAB1R的相互作用,增加GABAB1R的磷酸化水平密切相关。联合使用Baclofen恢复细胞内Ca2+浓度和Ca MKIIα的表达水平,减少p-Ca MKII-GABAB1R的相互作用和GABAB1R的磷酸化水平,进一步证实GABABR细胞膜表达机制与Ca2+/Ca MKII密切相关。结论:在CORT诱导的抑郁细胞模型中,HIPP和NAc的原代神经元细胞膜GABABR表达下降;其分子机制与增加的Ca2+/Ca MKIIα,p-Ca MKII-GABAB1R的相互作用和GABAB1R磷酸化水平密切相关。