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艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)是人类重大疾病,虽然国内外已开展了大量的探索性研究,至今未见有效的防治手段,其主要原因之一是缺少能够感染HIV(Human immunodeficiency virus)致病的动物疾病模型。目前诸多研究发现TRIM5alpha(Tripartite motif protein 5 alpha)是抑制HIV感染的限制因子,能抑制多种逆转录病毒,它是重要的抗病毒因子。TRIM5α包含了RING结构域、B-Box结构域、Coiled-coil结构域和SPRY(B32.0)结构域。HIV包膜和宿主细胞膜融合之后,衣壳和TRIM5α蛋白多聚体特异性的结合,TRIM5α发挥泛素连接酶的活性,干扰了病毒脱衣壳的有序过程,从而达到抑制病毒的目的。TRIM5α在细胞内主要以三聚体的形式存在,胞质内的TRIM5α蛋白具有实质抑制HIV-1的能力。食蟹猴TRIM5α比人类TRIM5α有更强的抑制HIV-1逆转录的效力。本研究试图通过敲低食蟹猴TRIM5α基因,建立有可能感染HIV的动物模型及探究TRIM5α的重要功能。基于此,本研究针对食蟹猴TRIM5α基因,利用RNAi(Ribose nucleic acid interfere)技术合成了相应的shRNA(Short hairpin RNA),构建了含有相应shRNA序列的3个shRNA质粒,分别命名为shRNA1质粒、shRNA2质粒和shRNA3质粒。将表达质粒和包装质粒共转染293T细胞,制作出相应的慢病毒载体。将得到的慢病毒分别感染食蟹猴胚胎成纤维细胞(Cynomolgus monkey embryo fibroblast,CMEF),被感染的细胞通过流式细胞仪分选得到稳定表达的CMEF细胞系,分别命名为NTC(Negative Temperature Coefficient)-CMEF、shRNA1-CMEF、shRNA2-CMEF和shRNA3-CMEF细胞。通过qRT-PCR分别检测TRIM5α基因的表达水平,结果发现NTC-CMEF细胞内TRIM5α基因水平是野生型CMEF表达水平的97%,shRNA1-CMEF、shRNA2和shRNA3细胞内的TRIM5α基因水平分别是野生型CMEF的52%,43%和39%。通过Western blot检测TRIM5α的蛋白表达水平,结果发现NTC-CMEF细胞内TRIM5α蛋白表达水平是野生型CMEF表达水平的108%,shRNA1-CMEF、shRNA2-CMEF和shRNA3-CMEF细胞内的TRIM5α蛋白基因水平分别是野生型CMEF的59%,47%和49%。在验证TRIM5α敲低对HIV病毒感染方面,利用表达RFP的假HIV病毒,分别对NTC-CMEF、shRNA1-CMEF、shRNA2-CMEF和shRNA3-CMEF细胞进行再次感染实验,结果表明TRIM5α基因敲低后的食蟹猴细胞系相对野生型细胞可以抑制假HIV-1病毒的感染能力。在食蟹猴胚胎上初步验证了shRNA3慢病毒载体的感染能力。综上所述,本研究成功获得了在细胞水平上得到验证的食蟹猴TRIM5α基因敲低的慢病毒载体,并在食蟹猴胚胎上进行了初步研究。本论文研究为建立艾滋病疾病动物模型提供了重要的思路和依据。