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S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase, SAHH)广泛存在于生物体内,是已知的唯一能够水解S-腺苷-L-高半胱氨酸(S-adenosyl-L-homocysteine, SAH)成半胱氨酸(Hcy)和腺苷(Ado)的酶。SAH作为转甲基反应的抑制剂,与S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine, SAM,体内甲基供体)的比值常用来作为衡量植物整体甲基化水平的重要指标。在该研究中,根据已知的大叶落地生根(Kalanchoe daigremontiana) KdSAHH基因序列(GenBank登录号：KF953475),对该基因进行亚细胞定位分析、干旱表达分析以及烟草转化,以初步鉴定KdSAHH基因的功能,为后续全面深入研究该基因提供一定的借鉴与参考。通过研究,得到如下结论：1.构建了亚细胞定位表达载体3302Y-KdSAHH,利用瞬时转化法注射健康生长三周大小的本生烟草叶片,暗培养48 h后在激光共聚焦显微镜下观察蛋白的表达情况,结果显示,黄色荧光在细胞质与细胞核中均有分布,表明大叶落地生根SAHH蛋白定位于细胞质与细胞核。2.对健康生长的大叶落地生根植株进行自然干旱处理,分别在土壤相对含水量达到20%、10%、3%时的三个时间点取样,通过半定量RT-PCR分析KdSAHH基因的表达模式,结果显示,随着干旱胁迫程度的加重,KdSAHH的表达量逐渐升高,表明该基因与抗旱性相关。3.构建了植物超表达载体pZH01-KdSAHH,利用农杆菌介导的叶盘法转化野生型烟草W38,经过诱芽、生根得到烟草再生植株,对再生烟草分别进行载体HPT基因片段及目的基因KdSAHH的阳性检测,结果显示共获得9株阳性植株。4.用20%的PEG6000对转KdSAHH烟草和野生型烟草进行模拟干旱处理,分别在0h,12h和24 h取样,测定相关生理指标。结果显示,在PEG6000处理的24 h,两种烟草均表现出了明显的失水症状,转KdSAHH烟草萎蔫程度较轻,上端仍有部分叶片保持挺立,而野生型烟草所有叶片均表现出明显的失水症状。与野生型烟草相比,转基因烟草叶片RWC与Chl含量下降程度较轻,两种烟草的叶片RWC在24 h差异显著(P<0.05),Chl含量在12与24h均差异显著(P<0.05),表明在干旱胁迫下,转基因烟草能够保持相对稳定的代谢。两种烟草在干旱胁迫下产生的MDA含量均有所增加,相比之下,野生型烟草的上升程度较大,在24 h两者差异显著(P<0.05),表明转基因烟草膜脂过氧化程度较轻,受伤害小。两种烟草的SOD含量与POD含量均呈明显的上升趋势,相比之下,野生型烟草产生了更多的SOD和POD。两者的POD含量在12与24 h差异显著(P<0.05),SOD含量则无明显差异。分析可能是因为转基因烟草抗旱性增强,故而未产生较多的活性氧。