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目的:1.研究Rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的具体作用;2.研究Rev-erbα在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖中的具体作用;3.明确Nlrp3是否是Rev-erbα抑制VSMC增殖的重要靶点。方法:1.在体实验:通过机械损伤颈动脉内皮法构建血管内皮损伤模型,以特异性激动剂(SR9011)、抑制剂(SR8278)干预血管组织中Rev-erbα的活性。(1)采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)检测颈动脉内膜增生情况;(2)采用免疫组化染色法检测颈动脉内膜细胞增殖情况;(3)应用qRT-PCR及Western blot技术检测颈动脉中Rev-erbα表达水平变化。2.体外实验:采用100nmol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)干预小鼠VSMC 24小时诱导体外增殖,通过SR9011、SR8278干预VSMC中Rev-erbα的活性,另采用特异性siRNA转染技术敲低VSMC中核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3,Nlrp3)水平。(1)采用qRT-PCR及Western blot检测VSMC中Rev-erbα、Nlrp3表达水平变化;(2)通过CCK-8比色法(cell counting kit-8,CCK-8)检测VSMC增殖率;(3)根据免疫荧光染色Ki-67阳性细胞率检测VSMC增殖情况。结果:1.Rev-erbα在颈动脉组织及VSMC中均有表达。2.在体实验发现,与假手术组相比,内皮损伤组内膜/中膜比值及增生内膜中Ki-67阳性细胞率增加(P<0.01),血管组织中Rev-erbα表达水平降低(P<0.01)。3.应用SR9011激动Rev-erbα后,可降低内皮损伤后血管增生内膜/中膜比值(P<0.01);应用SR8278抑制Rev-erbα后,可增加内皮损伤后血管增生内膜/中膜比值(P<0.01)。同时,免疫组化结果也提示,应用SR9011激动Rev-erbα后可减少血管内皮损伤后增生内膜中Ki-67阳性细胞比率(P<0.01);应用SR8278抑制Rev-erbα后,可增加血管内皮损伤后增生内膜中Ki-67阳性细胞比率(P<0.01)。4.在体外实验中,与对照组比较,AngⅡ组CCK-8 OD值及Ki-67阳性细胞率增加(P<0.01);通过PCR及Western blot结果显示,与对照组比较,AngⅡ组Rev-erbα表达水平降低(P<0.01)。5.应用SR9011激动Rev-erbα后,与AngⅡ组相比,CCK-8吸光度OD值及Ki-67阳性细胞率降低(P<0.05);应用SR8278抑制Rev-erbα后,与AngⅡ组相比,CCK-8吸光度OD值及Ki-67阳性细胞率增加(P<0.05)。6.应用SR9011激动Rev-erbα后,与AngⅡ组相比,Nlrp3 mRNA转录及蛋白表达水平降低(P<0.05);应用SR8278抑制Rev-erbα后,与AngⅡ组相比,Nlrp3 mRNA转录及蛋白表达水平增加(P<0.05)。7.Nlrp3基因敲减后,与AngⅡ组比较,Ki-67阳性细胞率降低(P<0.01);与AngⅡ+SR8278组比较,AngⅡ+SR8278+si-Nlrp3组Ki-67阳性细胞率减少(P<0.01);与AngⅡ+si-Nlrp3组比较,AngⅡ+SR8278+si-Nlrp3组Ki-67阳性细胞率无显著差异(P>0.05)。结论:1.内皮损伤后血管增生内膜中Rev-erbα的表达降低,激动Rev-erbα可抑制内膜增生,抑制Rev-erbα可促进内膜增生。2.增殖期VSMC中Rev-erbα的表达降低,激动Rev-erbα可抑制VSMC增殖,抑制Rev-erbα促进VSMC增殖。3.Nlrp3可能是Rev-erbα抑制VSMC增殖的重要靶点。