嗜盐少动鞘氨醇单胞菌发酵产结冷胶的研究及其应用初探

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少动鞘氨醇单胞菌是近年研究用来发酵产结冷胶最多的菌株。在发酵过程中,培养基成分(碳源、氮源、无机离子、氨基酸等)和发酵条件(发酵温度、培养基的原始pH、装液量、搅拌速度、接种量等)对产物的性质如分子质量分布、凝胶特性、流变学特性等均有显著影响。本论文研究了从高原的野生徽孔草种籽内分离并筛选得到的1株内生细菌。经生物学鉴定和性能分析,确定该菌为一株嗜盐少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis),能发酵产结冷胶。并通过新型的突变方法——常压室温等离子体突变法(ARTP)对高产优良菌株的进行选育,研究了嗜盐少动鞘氨醇单胞菌的发酵产结冷胶的技术及工艺,并对结冷胶的流变学性能和应用进行初探。本论文的主要研究结果如下:(1)生产菌株的筛选、鉴定。对分离自青藏高原野生微孔草籽的菌株进行筛选,筛选获得1株产胞外多糖的优良菌株,通过形态观察和16S rDNA序列分析等方法鉴定和耐盐性能分析,确定其为该菌株鉴定为嗜盐少动鞘氨醇单胞菌(halobacterium S. paucimobilis),将该菌株命名为嗜盐少动鞘氨醇单胞菌QHZJUJW (halobacterium S. paucimobilis QHZJUJW)。(2)对少动鞘氨醇单胞菌QHZJUJW (halobacterium S. paucimobilis QHZJUJW)进行ARTP突变,然后在带有氨苄青霉素的LB平板上进行筛选,再经过多次的液体发酵实验以及遗传稳定性实验,获得1株产胶量较好,遗传性能稳定的菌株302。该菌株的最高产胶量可以达到18.0g/L,与原始菌株相比提高了20.0%。(3)用单因素实验的方法确定产结冷胶的最佳发酵碳源和氮源,然后采用响应面方法嗜盐少动鞘氨醇单胞菌QHZJUJW (halobacterium S. paucimobilis QHZJUJW)产胶的培养基进行发酵优化,并对其发酵条件进行了研究。由响应面确定了嗜盐少动鞘氨醇单胞菌QHZJUJW发酵产结冷胶的培养基组成为:蔗糖40g/L、蛋白胨3.0g/L、硫酸镁3.2g/L、磷酸二氢钾9.2g/L、磷酸氢二钠7.5g/L硫酸钾4.3g/L。在此优化条件下,结冷胶产量达19.89士0.68g/L,与预测值20.12g/L接近。其发酵培养的条件为:pH7.0为最适的培养基初始pH值,种龄在16-24h接入发酵培养基最好,选择摇瓶发酵装液量为50mL,接种量为10%。这为嗜盐少动鞘氨醇单胞菌QHZJUJW的下一步研究奠定了基础。(4)通过对嗜盐少动鞘氨醇单胞菌QHZJUJW (halobacterium S. paucimobilis QHZJUJW)产胞外结冷胶的纯化,并借助紫外扫描、红外光谱、核磁共振、拉曼光谱和原子力显微镜等方法进行分析检测,初步断定该菌所产的胞外多糖为结冷胶。(5)通过旋转流变仪测定几种不同结冷胶和黄原胶流变性能,并对其进行比较分析,几种胶体的性质差异不大。在探讨结冷胶在面条加工中的应用,先试验了几种食用胶对面粉糊性能的差异,发现几种食用胶对面粉糊体系的粘度影响相似,而弹性性能的影响却有差异。最后通过对面条的TPA指标比较分析,研究发现结冷胶对面条的性能具有良好的提高效果。
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