论文部分内容阅读
目的1.探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow—derived mesenchymal stem cells,BMSC)和软骨细胞共培养的可行性,初步阐述两种细胞相互作用的可能机制,为扩大和优化软骨组织工程种子细胞源提供实验依据。2.体外研究脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)的降解性能、孔隙率及与共培养细胞的黏附率。3.共培养细胞与DBM复合修复兔膝关节软骨全层缺损,对修复组织进行评分,评价修复效果,为临床应用组织工程学方法修复关节软骨缺损提供实验基础和理论依据。 方法 1.取细胞浓度为3×10~5/ml的第二代BMSCs和软骨细胞,按2:1比例混匀共培养(A组),并与同浓度(3×10~5/ml,B组)和低浓度(浓度为1×10~5/ml,与共培养组中软骨细胞的终浓度相等,C组)单独培养的软骨细胞进行比较,绘制细胞生长曲线,测定消化培养液中糖胺多糖含量。2.根据Urist描述的方法制备DBM,扫描电镜观察DBM的超微结构。将DBM置于PBS液中测定其降解率;采用液体置换法(liquid replacement method)测试支架材料的孔隙率;测定DBM与共培养细胞的黏附率;3.将BMSCs和软骨细胞共培养与DBM复合体外培养3天后,移植于兔膝关节软骨全层缺损处。选用健康的青紫兰兔36只,随机分为共培养细胞/DBM实验组、DBM对照组和空白对照组。实验组股骨髁间窝软骨缺损处植入自体共培养细胞/DBM,对照组单纯植入DBM,空白对照组不作任何植入,分别于术后8周和16周各处死6只动物,取材对修复组织进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学评分标准对修复组织进行评分,数据输入SPSS 10.0软件进行统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义。 结果 1.A组细胞平均群体倍增时间为3天,B组为7天,C组为8天;A组共培养细胞增殖比B组和C组明显增快(P<0.05)。A组消化培养液中 GAG含量为 81.00±3.52(μg/ml),B组为61.67±6.71(μg/ml),C组为20.33±2.50(μg/ml)(p<0.05)2.扫描电镜观察脱钙72小时的DBM呈海绵多孔状结构,孔隙直径在210～390μm之间,平均为270μm,所测孔隙率为88.00±1.83;DBM的降解随时间的延长逐渐加速,体外完全降解约需12周;共培养