利胆合剂拮抗氧化应激治疗胆汁淤积性肝纤维化的临床及实验研究

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wsx19781029
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目的:通过查阅资料,学习熟悉中西医文献有关婴儿胆汁淤积,胆汁淤积肝纤维化与氧化应激关系的基础上,对婴儿胆汁淤积性肝病致胆汁淤积性肝纤维化患儿采用以利胆合剂为基础方的治疗方案,并检测患儿肝纤维化四项、肝脏弹性检查、氧化应激生物指标,观察利胆合剂对胆汁淤积性肝纤维化的临床疗效。同时开展动物实验研究,观察利胆合剂对DDC饮食导致胆汁淤积性肝纤维化模型小鼠的影响,探讨利胆合剂拮抗胆汁淤积性肝纤维化的机制,认识氧化应激在胆汁淤积性肝纤维化发生发展过程中的作用,为利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝病的进一步研究提供依据。方法:1.理论研究:通过查阅中医古籍及检索10年来“知网”、“万方”“维普”和“pubmed”中胆汁淤积性肝纤维化的临床及实验研究文献,系统回顾了中医病名沿革、病因病机、辨证论治,西医的流行病学概况、临床进程、危险因素、发病机制及其治疗,以及氧化应激在胆汁淤积性肝纤维化中的作用,为利胆合剂改善胆汁淤积性肝纤维化可能的作用的研究提供新的研究思路。2.临床试验研究:血液样本均来源于华中科技大学附属武汉儿童医院,在本研究中,详细列出每例患儿的一般情况、主要症状、次要症状、体征、实验室指标、超声室指标、辨证分型等根据纳入标准和排除标准进行分组:其中共40例,观察组中湿热熏蒸证4例,寒湿阻滞证8例,瘀积发黄证7例,对照组中湿热熏蒸证5例,寒湿阻滞证9例,瘀积发黄证7例。分别收集、统计并分析各组患儿的一般资料,实验室检查、肝脏弹性检查、总体疗效、中医证候疗效等对观察组和对照组进行组间的对比,组间对比观察相同证型情况给予利胆合剂对患儿预后影响。3.动物实验研究:血液样本来源于C57BL6/J幼龄小鼠,建立胆汁淤积性肝纤维化小鼠模型,同时设立空白组,将模型组随机分为4组:模型组、利胆合剂组、非诺贝特组、熊去氧胆酸组,分别给予蒸馏水、利胆合剂、非诺贝特、熊去氧胆酸,采集五组小鼠的血液肝脾组织标本,检测血生化指标,观察肝脏病理学改变,采用SPSS22.0和stata14.0统计软件统计出肝功能生化指标、肝纤维化四项指标、氧化应激指标等,观察利胆合剂对肝纤维化及氧化应激的生物标志物的作用,观察氧化应激在利胆合剂改善胆汁淤积性肝纤维化中的作用。结果1临床实验中胆汁淤积性肝纤维化的两组客观性指标结果临床研究显示:两组患儿一般资料具有可比性,观察组肝脾回缩时间较对照组短;观察组与对照组治疗后TBIL、DBIL、ALP、γ-GGT、ALT、AST、TBA比较,存在显著差异;观察组与对照组治疗后MDA、GSH比较,无显著差异,观察组SOD与对照组治疗后比较存在显著差异;观察组HA、P-III-P、IV-C、LN与对照组治疗后比较存在显著差异;观察组肝脏弹性检查与对照组治疗后比较存在显著差异;观察组与对照组治疗后APRI比较存在显著差异;两组治疗胆汁淤积性肝纤维化总体有效;中医证候疗效总有效率观察组优于对照组。2动物实验中利胆合剂改善胆汁淤积性肝纤维化幼龄小鼠的客观性指标结果观察结果显示:正常组小鼠一般情况可,其他组小鼠毛色暗淡无光,部分脱毛,利胆合剂组、非诺贝特组的肝脏指数与模型组比较存在显著性差异,熊去氧胆酸组肝脏指数与模型组无差异,利胆合剂组、非诺贝特组、熊去氧胆酸组的脾脏指数与模型组比较无显著差异。空白组小鼠肝脏鲜红色,模型组小鼠肝脏颜色为暗黑色,体积稍小,利胆合剂组、非诺贝特组、熊去氧胆酸组小鼠颜色暗黑色,体积较模型组稍大。模型组小鼠HE染色可见肝细胞明显淤胆而变性坏死,大量炎性细胞浸润,Masson染色可见大量胶原沉积,交联呈网状结构,假小叶不完全分割.利胆合剂组、非诺贝特组、熊去氧胆酸组较模型组减轻,汇管区炎症、汇管区扩大,模型组、非诺贝特组Metavir评分纤维化程度能达到2分,熊去氧胆酸组、利胆合剂组达到1分。模型组、利胆合剂组、非诺贝特组、熊去氧胆酸组TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP、γ-GT、HA、P-III-P、IV-C、LN、SOD、GSH、MDA与空白组存在显著差异,利胆合剂组、非诺贝特组、熊去氧胆酸组TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP、γ-GT、HA、PIII-P、IV-C、LN、SOD、GSH、MDA与模型组相比存在显著差异,非诺贝特组、熊去氧胆酸组TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP、γ-GT、HA、P-IIIP、IV-C、LN、SOD、GSH、MDA与利胆合剂组相比存在显著差异。结论1观察组治疗后MDA、GSH与对照组无差异,观察组肝功能、SOD、HA、P-III-P、IV-C、LN、APRI、肝脏弹性检查与对照组存在显著差异,两组治疗胆汁淤积性肝纤维化总体有效;中医证候疗效总有效率观察组优于对照组,利胆合剂能改善胆汁淤积肝纤维化,降低氧化应激相关标志物水平。2动物实验中以幼龄小鼠为对象,根据肝脏病理改变及TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP、γ-GT、HA、P-III-P、IV-C、LN水平变化,DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化小鼠出现胆汁淤积、肝纤维化、说明造模成功,经利胆合剂、非诺贝特、熊去氧胆酸干预,各组均能改善小鼠肝脏病理,胆汁淤积、肝纤维化程度,其中利胆合剂效果最佳,根据SOD、GSH、MDA水平的变化,证实氧化应激标志物与胆汁淤积肝纤维化病程和严重程度具有一致性,显示氧化应激在胆汁淤积肝纤维化中起着重要作用。
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