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目的：(1)评价纳米银(silver nanoparticles, AgNPs)溶液冲洗对牙本质粪肠球菌(Enter ococcusfaecalis, E. faecalis)生物膜的抗菌效果；(2)评价AgNPs凝胶封药对牙本质E. faecalis生物膜的抗菌效果；(3)评价AgNPs凝胶处理的牙本质抵抗E. faecalis的附着和生物膜形成的能力；(4)制备并表征介孔生物活性玻璃(mesoporous bioactive glasses, MBGs)和载银介孔生物活性玻璃(Ag-loaded mesoporous bioactive glasses, Ag-MBGs),初步评价Ag-MBGs对根管E. faecalis生物膜的抗菌效果。方法：实验一：在牙本质片上构建4周E. faecalis生物膜,然后将96个牙本质片随机均分为4组(n=24),分别以0.1%AgNPs溶液、2%次氯酸钠(sodium hypochlorite, NaOC1)溶液和生理盐水为冲洗液,使用注射器针头冲洗牙本质E.faecalis生物膜2分钟,未处理标本作为对照组。利用扫描电镜(scanning electron microscopy, SEM)观察每组12个标本E.faecalis生物膜的结构,每组另外12个标本用激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscopy, CLSM)结合LIVE/DEAD荧光染色法分析E.faecalis生物膜内活菌比,评价0.1%AgNPs溶液冲洗对牙本质E.faecalis生物膜的抗菌效果。实验二：在牙本质片上和牙根锥块内构建4周E.faecalis生物膜,然后将80个牙本质片和40个牙根锥块随机均分为4组(每组20个牙本质片和10个牙根锥块),分别用0.02%AgNPs凝胶、0.01%AgNPs凝胶、氢氧化钙(calcium hydroxide, Ca(OH)2)糊剂和生理盐水封药7天。SEM观察每组10个牙本质片上E. faecalis生物膜的结构,CLSM结合LIVE/DEAD荧光染色法分析每组另外10牙本质片上残留E. faecalis生物膜内活菌比。获取牙根锥块内0～100μm和100～200μm深度的牙本质碎屑,分散、梯度稀释后涂布BHI琼脂培养板,培养24小时后计数菌落形成单位(colony forming units, CPUs),评价药物对牙本质小管内E. faecalis的抗菌效果。实验三：将200个牙本质片平均分为5组：生理盐水组、Ca(OH)2糊剂组、2%洗必泰(Chlorhexidine, CHX)凝胶组、0.01%和0.02%AgNPs凝胶组。标本经上述药物处理7天后接种E. faecalis悬液,37℃厌氧培养1天或7天。SEM定性评价E. faecalis对牙本质的附着和生物膜形成情况,CLSM结合LIVE/DEAD荧光染色法定量分析牙本质表面附着的E. faecalis总量和活菌比。制备牙本质片20个,分别用0.01%和0.02%AgNPs凝胶封药7天。将牙本质片放入无菌24孔板中,每孔加入1mL ddH2O。1天和7天时,分别吸取每组5个孔内的液体,电感耦合等离子原子发射光谱仪测量液体中Ag+浓度。实验四：采用溶剂挥发诱导自组装结合凝胶-溶胶技术合成MBGs,采用离子吸附法制备Ag-MBGs,表征MBGs和Ag-MBGs的理化性能,评价MBGs和Ag-MBGs在Tris-HCl缓冲液中的离子释放特征,以及浸入模拟体液(simulated body fluids, SBF)后的pH值变化情况。在12个根管预备后的单根下颌前磨牙根管内构建4周E. faecalis生物膜,分别用Ca(OH)2糊剂、MBGs和Ag-MBGs封药7天。利用SEM、CLSM结合LIVE/DEAD荧光染色法观察药物处理后根管内的E. faecalis生物膜结构,初步评价Ag-MBGs对根管E. faecalis生物膜的抗菌效果。结果：实验一：经2%NaOC1溶液冲洗的牙本质E. faecalis生物膜结构明显破坏,仅少量的生物膜残留在牙本质表面；0.1%AgNPs溶液冲洗并不能破坏牙本质E.faecalis生物膜结构完整性,生物膜内活菌比低于未处理组(P<0.05),但与生理盐水冲洗组无统计学差异(P>0.05)。实验二：AgNPs凝胶显著破坏牙本质E. faecalis生物膜的结构并杀灭生物膜内细菌。其中0.02%AgNPs凝胶组牙本质E. faecalis生物膜内活菌比、牙本质小管内0～100μm和100～200μm深度的CFUs少于0.01%AgNPs组和Ca(OH)2组(P<0.05),后两组又显著少于生理盐水组(P<0.05)。实验三：生理盐水和Ca(OH)2处理的牙本质表面聚集大量E. faecalis,随着培养时间延长逐渐形成稠密的E. faecalis生物膜；AgNPs凝胶处理的牙本质表面附着的细菌较少,形成的E. faecalis生物膜稀疏；而2%CHX处理的牙本质表面附着的细菌最少。2%CHX组平均细菌总量和活菌比显著低于AgNPs凝胶组(P<0.05),后者又显著低于生理盐水组和Ca(OH)2组(P<0.05)；培养1或7天,0.01%和0.02%AgNPs凝胶组的平均细菌总量和活菌比均无明显差异(P>0.05)。 AgNPs凝胶处理后的牙本质浸泡在ddH2O中1天或7天,0.02%AgNPs凝胶组牙本质释放的Ag+量均高于0.01%AgNPs凝胶组(P<0.05)。0.02%或0.01%AgNPs凝胶组牙本质浸泡在ddH2O中7天释放的Ag+量高于1天,但差异无统计学意义(P>0.05)。实验四：合成的MBGs为典型的介孔材料：表面光滑均匀平整,内部有规则的介孔通道,Ⅵ型氮气吸附-脱附等温线和H1型滞后环,平均孔径为4.7nm,对应的XRD小衍射角出现三个衍射峰。Ag-MBGs内部保持介孔结构,但介孔通道边缘变得不规整,表面和内部有大量纳米颗粒,EDS能谱证实为Ag元素。MBGs和Ag-MBGs浸泡在SBF中,SBF的pH值轻度上升,并保持稳定；在Tris-HCl中各元素呈缓释状态,释放速率随时间延长而降低。经Ag-MBGs处理的根管E. faecalis生物膜结构破坏明显,仅残留少量细菌在牙本质小管口内；而经MBGs处理的E. faecalis生物膜结构完整,残留大量活菌。有少量Ag-MBGs和MBGs颗粒残留在根管壁上。结论：1.AgNPs对牙本质E. faecalis生物膜的抗菌效果与其应用方式有关。AgNPs溶液冲洗不能破坏牙本质表面E. faecalis生物膜结构,但AgNPs凝胶封药能破坏牙本质表面的E. faecalis生物膜结构,并有效杀灭牙本质表面和牙本质小管内的E. faecalis.2.2%CHX处理的牙本质能产生明显的持续抗菌效果。AgNPs凝胶处理的牙本质浸泡在液体中迅速释放Ag+,不能形成缓释；AgNPs凝胶处理的牙本质与E. faecalis接触早期可导致E. faecalis死亡,但7天后出现E. faecalis对牙本质的附着和生物膜的形成。Ca(OH)2处理的牙本质无持续抗菌效果。3.Ag-MBGs形成Ag+缓释系统,对根管内E. faecalis生物膜具有较强的抗菌效果,抗菌效果与其释放的Ag+有关。