A1cf八个氨基酸差异选择性剪接对核定位功能的影响及其抗体制备

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RNA的编辑是一个很重要的遗传适应过程,包括核苷的插入或缺失(indel)和碱基的替换(replace)这两种编辑类型,编辑过程影响了基因的表达,产生了不同的氨基酸和新的开放阅读框,生成不同的基因产物,执行不同的基因功能。RNA编辑广泛存在于各种生物中(原生动物、哺乳动物、植物、真菌、昆虫、病毒等)。A1cf最初是在apoB mRNA的编辑过程中发现的,他包含有三个RNA的识别区域(RRMs)和一个核定位序列(ACF nuclear localization sequence,ANS),它作为APOBEC-1的互补作用因子,与APOBEC-1一起组成编辑复合体,参与apoB mRNA的编辑。A1cf(Apobec-1complementation factor)的选择性剪接会导致多种突变体的产生,其中一种就是在核定位序列中有8个氨基酸的缺失,这8个氨基酸对a1cf功能的影响目前尚不清楚。  Hippo-Yap和Hedgehog信号通路是在果蝇里发现的,并且是高度保守的,Hippo-Yap信号通路能够调控器官大小,细胞的增殖凋亡,癌症的发生,组织的修复和再生都与Hippo-Yap信号通路有关。Hedgehog信号通路在胚胎的发育过程中具有很重要的作用,参与了细胞的多种功能,如细胞的生长,存活,凋亡和器官的形态发生。在本论文中我们对a1cf进行了生物信息学分析,氨基酸序列比对,进化树构建,蛋白结构域分析都显示a1cf在各物种间存在高度保守性,对a1cf的突变体(缺失了8个氨基酸)的物种间保守性分析也显示这8个氨基酸的差异在各物种间具有保守性。对a1cf的结构分析得出8个氨基酸位于a1cf的核定位序列中,为此我们构建了a1cf与GFP的融合蛋白,检测结果显示8个氨基酸缺失后会影响a1cf入核。双荧光素酶报道分析结果显示a1cf的突变体A1CF(△8aa)会激活Hippo-Yap和Hedgehog信号通路。此外,我们还制备了a1cf的多克隆抗体,为a1cf功能的进一步研究奠定了基础。这些研究结果提示了a1cf对细胞的生长生存有很重要的作用,Hippo-Yap和Hedgehog信号通路对细胞的生长和生存也有很重要的作用,a1cf可能通过某种机制去影响了Hippo-Yap和Hedgehog信号通路,从而影响细胞的生长生存。
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