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灰树花(Grifolafrondosa)是一种药食两用真菌,其多糖有独特的生物活性,无毒且安全食用。近年来,国内外的学者也更关注于其生物活性的研究。本文针对灰树花子实体进行分离提取以得到纯化的多糖,并进一步研究其化学组成和结构。同时,利用细胞实验探讨该子实体多糖的抗癌作用机理,为开发新的功能多糖产品提供理论基础。本论文采用水提醇沉法获得灰树花子实体粗多糖。该粗多糖经Sevag法脱蛋白、浓氨水法脱色以及超滤法等去除杂质得到粗多糖组分。粗多糖通过凝胶色谱法得到的均一组分多糖,命名为GFD。通过高效液相色谱法(HPLC)鉴定GFD为宏观均一组分,分子量约为54kDa。显色实验结果表明,该多糖是一种不具有还原性羰基和酚羟基的非淀粉类多糖。气相色谱结果表明其单糖组成为半乳糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖,摩尔比为1.00: 1.09: 1.57: 43.90,质量分数分别为4.9%,7.9%,8.16%,79.04%。红外光谱实验结果表明,GFD为α-型吡喃多糖。利用MTT法检测GFD抑制人结肠癌细胞HT-29的增殖。MTT结果表明,GFD可抑制HT-29的细胞增殖,在一定的浓度以及时间范围内,呈现出明显的浓度依赖和时间依赖性,当多糖浓度为160μg/mL,作用48h时,细胞抑制率达到最大值54.9%。扫描电子显微镜结果显示,随着作用时间的延长至48h时,凋亡小体逐渐增多,证明GFD具有诱导HT-29细胞凋亡的作用。AO/EB和DAPI染色HT-29细胞呈现明显的凋亡形态学改变。Western blot实验结果表明:GFD作用于HT-29细胞后,引起胞质内PI3K表达下调,p-JNK蛋白表达上调,引起线粒体上的Bcl-2表达下调,Bax表达上调,与细胞凋亡直接相关的Bcl-2/Bax的比例下调。Bcl-2/Bax的比例下调可以直接刺激胞浆内细胞色素C表达上调,进而引发Caspase级联反应,上调Caspase-8。最终诱导HT-29细胞发生凋亡。