长期以来,癌症疾病无情地掠夺者着人类宝贵的生命。因为癌症的特殊性,尽管在科技高速发展的今天,人类还是没能找到一种快速、准确、安全无毒的方式祛除癌症。相当长的时间内,人们治疗肿瘤的方式局限于手术治疗,辅助以放疗和化疗以及多种化疗药物联合或放疗和化疗联合等方式。但是手术本身会增加肿瘤细胞扩散的几率,而放疗和化疗则对病人本身的身体健康造成了严重的伤害,不利于肿瘤患者的生存与恢复,且化疗药物本身存在着肿瘤耐药性的问题。因此找到靶向肿瘤,且对机体无毒或低毒的药物仍然是改善人类健康问题的关键。然而,近几年有学者发现通过过表达小鼠体内的p53和p19ARF水平能够使小鼠获得抵抗肿瘤发生的能力,且小鼠的寿命没有得到影响。而通过过表达小鼠体内的端粒酶催化亚基TERT则可以在保证不增加小鼠患癌风险的同时延长小鼠的寿命。这些结果提示我们:如果能筛选到同时升高机体的p53和p19ARF/p14ARF或TERT的水平的药物,有可能会使机体同时获得抗衰老与抗肿瘤的能力。通过建立p53和p19基因的GFP荧光载体细胞筛选体系,并利用该体系对云南特色植物进行初步的荧光筛选,并对初步筛选得到植物初提物进行蛋白水平的验证,以及细胞毒性检验,最后针对稳定激活靶向基因的提取物进行初步的抗肿瘤活性检验以及初步的机制探究。在构建荧光报告质粒载体的过程中。将p53/p19的启动子序列替换绿色荧光标签蛋白(GFP)的启动子序列,进行基因重组,然后将重组质粒转化到大肠杆菌中挑选阳性菌落进行扩增,将提取的质粒以脂质体转染的方式转染到宿主细胞(p53-/-的小鼠胚胎成纤维细胞)中进行基因组整合,进一步筛选到阳性细胞后进行传代冻存操作。药物处理后采用倒置荧光显微镜进行观察和图像采集。此外,运用蛋白质免疫印迹法对荧光初步筛选出的药物进一步的进行验证。以及运用MTT和SRB两种方法对提取物的细胞毒性进行检测,给药浓度为 0μg/ml、1Opg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml。在后续实验中,我们采用RT-PCR检测提取物对小鼠正常MEF细胞中TERT表达水平的影响。并对最终筛选的药物(药物名称)的抗肿瘤活性进行初步探究。细胞平台的荧光初步筛选统计结果显示A53、A54、A79、A89、A90、B38、B60、B90八种天然提取物能稳定激活对应启动子,因此挑选这八种提取物进行后续的实验。MTT和SRB实验结果显示,这八种药物在0-80μg/ml浓度梯度下没有IC-50值,对细胞杀伤性很小。Western-Blot结果显示B60和B90在蛋白表达水平上能稳定激活p53和p19。RT-PCR结果显示A54、A89、B90等天然提取物能降低小鼠WT细胞内的TERT活性。B90号药物十字崖爬藤能定激活p53和p19,能抑制结肠癌和肝癌细胞的生长,此外十字崖爬藤还能抑制肝癌和骨肉瘤细胞的迁移率。从这些结果中我们可以看到,构建的启动子荧光细胞筛选平台具有较好的稳定性及可信度,能靶向筛选p53与p19。在植物粗提物的筛选中,SRB试验要优于MTT实验。Western-blot实验能较好的验证荧光初筛结果。十字崖爬藤的粗提成分具有较明显的抗肿瘤作用,其可能机制为激活p53、p19抗癌基因以及抑制端粒酶活性。