基于仿生酶联免疫分析技术检测氟喹诺酮类药物残留的研究

来源 :河北北方学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:PeNgxionglifanG2
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氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQNs)是一类高效的抗菌药物,具有抗菌谱广、抗菌能力强、效率高、成本低、结构简单、组织通透性强、对其他常用抗菌药物无交叉耐药性等特点。然而,由于养殖和生产过程中的不合理用药和用药过量,当通过食物链摄入时,残留的FQNs对人体的中枢神经系统和肝肾器官有一定的危害和毒性。出于安全性考虑,世界各国都规定了动物源性食品中FQNs残留的最大限量,但是,动物源性食品中FQNs残留问题依然存在。因此,建立一种快速、简单、高通量的检测方法是十分必要的。本研究将分子印迹技术与酶联免疫分析方法相结合,建立了动物源性食品中FQNs残留的快速检测新方法。主要研究结果如下:(1)制备沙拉沙星(Saraflaxacin,SALX)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFLX)酶标半抗原。采用活泼酯法,将SALX、OFLX标准品与辣根过氧化物酶偶联形成酶标半抗原。利用生物抗体绘制抑制率曲线,来评价酶标探针与抗体的亲和力,制备的酶标记物可以绘制抑制率曲线,表明酶标半抗原已成功合成。(2)仿生抗体的制备。采用分子印迹表面印迹法,在聚苯乙烯酶标板表面直接聚合形成分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymer,MIP)膜。采用傅立叶红外光谱、电镜扫描、吸附平衡结合和吸附动力学等方法对其性能进行了表征。实验结果表明,合成的MIP具有很好的印迹效果和较高的吸附性能,且传质速率较快。(3)优化实验条件,建立快速检测FQNs残留的仿生酶联免疫(Biomimetic Enzyme-linked Immunosorbent Assay,BELISA)新方法。对影响BELISA方法的条件进行了系统优化。实验结果显示,BELISA方法的最优条件是:以p H值为7.5的PBS作为缓冲溶液,酶标半抗原的稀释倍数为4500倍。在此条件下建立直接竞争BELISA方法,实验结果表明,该方法对SALX的灵敏度(IC50)和最低检测限(LOD,IC15)分别为317.84μg·L-1和3.66μg·L-1,对OFLX的灵敏度(IC50)和最低检测限(LOD,IC15)分别为190.83μg·L-1和0.71μg·L-1。为了验证方法的可行性,将该方法用于动物源性食品鸡肉、鱼肉和牛奶中SALX、OFLX添加回收实验,实验数据显示:SALX的回收率在83.40%~96.89%之间,相对标准偏差(RSD)小于7.22%;OFLX回收率在81.60%~95.30%之间,RSD小于7.59%。以上结果与高效液相色谱方法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测得的结果具有较好的一致性,表明该检测方法灵敏度较高,可应用于动物源性食品中SALX和OFLX抗生素残留检测。
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