【摘 要】
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目的:观察热敏灸“犊鼻”穴对膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis,KOA）兔模型背根神经节磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶（P-P38 mitogen activated protein kinase,P-P38MARK）、关节软骨抑癌基因P53（P53tumor suppressor gene,P53）以及半胱天冬氨酸蛋白酶3（cysteine aspartate—specif
【基金项目】
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国家自然科学基金“热敏灸膝关节骨性关节炎兔模型“犊鼻”穴的敏化效应及其机制研究”（NO:81760889）；
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目的:观察热敏灸“犊鼻”穴对膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis,KOA）兔模型背根神经节磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶（P-P38 mitogen activated protein kinase,P-P38MARK）、关节软骨抑癌基因P53（P53tumor suppressor gene,P53）以及半胱天冬氨酸蛋白酶3（cysteine aspartate—specific protease-3,Caspase-3）水平的影响,从软骨凋亡方向探讨热敏灸治疗KOA的可能作用机制。方法:将30只质量为2.25～2.75kg的6月龄新西兰健康大白兔随机分成空白组（6只）、模型组（6只）、艾灸组（18只）。适应性喂养3天后,空白组普通饲养,自由饮水,不予以任何干预;余下各组则进行15天的造模,具体方法为:向兔的右后膝关节腔内注射4%木瓜蛋白酶溶液0.5ml,每隔3天一次,共注射3次,并每天迫使兔活动1h。造模结束后,空白组无任何干预,模型组兔每日固定兔架40min,共干预7d;艾灸组进行温和悬灸右侧“犊鼻穴”40min,每日一次,共7d,治疗期间采用热断层扫描成像系统与温度记录仪测量兔腹部、髋关节、踝关节等区域温度,根据7d的温度波动来划分热敏灸组和非热敏灸组,温度连续波动>1℃有10只,归为热敏灸组;温度连续波动≤1℃有7只,归为非热敏灸组,分别从每组随机抽取6只。实验期间记录各组兔的一般状况及行为学变化。治疗结束后,采用光镜观察软骨细胞形态学改变并行Mankin评分,Western blot法检测脊髓背根神经节P-P38MARK蛋白的表达水平,Real-time PCR法检测软骨P53、Caspase-3基因的表达水平。结果:1.造模前,各组兔精神状态、饮食量等一般状况均无明显异常。造模后,空白组兔一般状况可,Lequesne MG评分为0。而造模组兔表现为精神差,饮食饮水明显减少,蜷缩角落,运动量少,被迫运动时呈跛行,甚至单腿跳跃;Lequesne MG评分明显增高（P<0.01）。2.治疗后,空白组兔一般状况及Lequesne MG评分未见明显变化,模型组、非热敏灸组、热敏灸组兔一般状况均有改善,Lequesne MG评分均降低,但仍显著高于空白组（均P<0.01）。其中在一般状况的比较中,模型组兔恢复较慢,非热敏灸组则不及热敏灸组改善明显;在Lequesne MG评分方面,与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组兔Lequesne MG评分均降低（P<0.05,P<0.01）,但组间比较无显著差异（P>0.05）。3.治疗后,模型组兔的Mankin评分、关节软骨P53、Caspase-3及背根神经P-P38MARK的表达量均显著高于空白组（P<0.01）;与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组兔的Mankin评分、关节软骨P53、Caspase-3及背根神经P-P38MARK表达水平均降低下降（P<0.05,P<0.01）,其中热敏灸组优于非热敏灸组（P<0.05）。结论:1.热敏灸可以改善KOA兔模型的一般状况及行为学表现,表明热敏灸能有效治疗KOA。2.热敏灸可以显著降低KOA兔模型软骨Mankin评分,下调凋亡相关因子（PP38MARK、P53、Caspase-3）的表达水平,调控软骨细胞的凋亡,修复软骨损伤,这是热敏灸治疗KOA可能的效应机制。
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