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目的:在Kamada“二袖套法”的基础上采用在供肝冷保存时经门静脉再灌注的方法建立稳定的大鼠原位肝移植动物模型,为以后进行肝移植免疫排斥、器官保存、缺血再灌注等进一步的实验研究提供安全、有效的模型制作方法。
方法:在Kamada“二袖套法”基础上适当改进建立大鼠肝移植模型。将30只接受供肝移植的SD大鼠随机分为5组(n=6):A组假手术组,开腹后不做任何处理即关腹;B组供肝修整后冷保存期不进行再灌注;C组供肝修整后以5ml生理盐水经门静脉灌注;D组供肝修整后以10ml生理盐水经门静脉灌注;E组供肝修整后以15ml生理盐水经门静脉灌注。然后以Kamada“二袖套法”为基础并做改进完成大鼠原位肝移植模型。观察各组受体大鼠下列各种指标:
1.一般情况术后苏醒时间、受体体重变化以及精神状态,活动、进食情况,皮肤黄染程度,小便颜色。
2.大鼠生存情况3各组术后1,4,7天血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(STB)和白蛋白(ALB)的变化,于术后第7天取部分肝组织行光镜检查,观察肝细胞及肝窦内皮细胞的形态学改变。
结果:
1.一般情况B组大鼠术后苏醒时间明显长于A组和D组(P<0.05)。A组体重逐日增加,活动进食水正常,未见皮肤黄染,大小便均正常,B、C、D、E组受体大鼠上述各个方面均有不同程度改变:进食量下降、活动迟缓、鼠耳皮肤及小便出现轻度黄染,但于术后3天上述症状均得到改善甚至消退;B组存活三天体重下降程度高于其余各组,和D组相比差异明显(P<0.05),B组存活一周体重增加程度明显低于A、D、E组(P<0.05)。
2.大鼠生存情况:A组、C组、D组和E组中位生存时间明显长于B组(P<0.05);但D组和E组中位生存时间无明显差异(P>0.05)。
3.术后大鼠肝功能情况:术后1、4、7天各组大鼠ALT均显著高于对照组(P<0.05),但D组大鼠ALT值明显低于与B组和C组(P<0.05);术后1、4、7天各组大鼠AST均显著高于对照组(P<0.05),D组大鼠术后1、4天AST值明显低于C组(P<0.05),并于术后7天相对于其它各组明显下降(P<0.05);除D组外,其余各组大鼠术后1、4天总胆红素均出现不同程度高于对照组,以B组最为明显(P<0.05),术后7天时B组总胆红素明显高于其它组(P<0.05),D组此时显著降低(P<0.05);术后1、4、7天各组大鼠ALB均显著低于对照组(P<0.05),但D组下降程度较低,其白蛋白仍明显高于B、C、E组(P<0.05),于术后4天开始升高,E组术后白蛋白始终处于较低水平。
4.组织病理学改变:A组术后1周可见肝窦轻度扩张,余未见明显异常;B组术后1周可见明显淤血改变,并于术后3天死亡大鼠肝脏发现肝细胞大片坏死伴有微脓肿形成;C组术后1周可见肝细胞索断裂,也可见淤血改变;D组术后1周可见汇管区淋巴细胞浸润,术后1月可见肝细胞小片坏死,伴有淋巴细胞浸润;E组术后1周可见肝细胞大片坏死,细胞桥消失,并可见小部分肝细胞出现脂肪空泡改变。
结论:通过改进技术改善肝功能,提高了生存率,使1周存活率达到83.7%,尤其在冷保存时经门静脉再灌注,在供肝的质量上明显优于不进行灌注组,并应严格掌握灌注液体量,10ml灌注量明显由于其它液体量,能有效地驱除供肝内残留的血液和气泡。另外,减少供肝的机械性损伤、避免套管的扭曲、提高血管的吻合质量以及缩短无肝期,都是减少术后并发症和提高移植物存活的关键。