巴戟天盐制工艺优选及盐制前后健脑作用比较研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wenshengfang1985
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目的:优选巴戟天的炮制工艺参数,确定盐巴戟天的最佳炮制工艺;比较分析巴戟天盐制前后的糖类成分变化;比较生巴戟天与盐巴戟天的健脑作用,探讨盐制对巴戟天化学成分和药效变化的影响,为中药炮制理论提供科学依据。方法:采用均匀设计法,对影响巴戟天盐制过程中的三个因素:盐水浓度,浸润时间,蒸制时间进行考察,每个因素设计六个水平。采用高效液相色谱法,以盐制后巴戟天的耐斯糖作含量的高低作为评价炮制工艺优劣的指标,确定盐巴戟天最佳炮制工艺,并对盐制前后的巴戟天中糖类的成分含量进行测定。色谱条件为色谱柱:Accusil C18(250mm×4.6mm,10μm);流动相:甲醇-水(3:97);柱温:30℃;流速:0.8mL·min-1;进样量:10μL;漂移管温度:80℃;雾化温度:5℃;氮气压力:3.5 MPa;增益:4。采用SPSS 19.0统计分析软件对巴戟天盐制前后糖类成分含量进行独立t检验统计分析,并比较其差异。采用AlC13诱导小鼠脑组织神经损伤,建立小鼠老年痴呆模型,通过灌胃生巴戟天与盐巴戟天的水提液,采用水迷宫法测试小鼠的学习能力,采用高效液相法(库伦阵列电位电化学检测器)测定小鼠单胺类神经递质去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺的含量,评价盐巴戟天炮制前后健脑作用的影响。结果:1巴戟天最佳盐制工艺优选结果通过对均匀试验设计因素水平表盐制后的巴戟天样品耐斯糖含量进行逐步线性回归分析,得到线性回归方程Y=10.671+0.007X1-0.952X3-0.009X4(P<0.05)。根据线性回归方程,得到巴戟天盐制的最佳工艺为:蒸制时间>食盐水量>浸润时间。确定巴戟天最佳盐制工艺为每100 g的生巴戟天样品应加食盐水120 mL(含食盐质量为2g),浸润时间为8.5 h,蒸制时间为5.5 h。验证实验结果表明RSD值为0.67%,表明该方法可靠。2巴戟天盐制后糖类成分比较结果巴戟天盐制后单糖成分显著增加,蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、蔗果五糖等寡糖类成分含量显著下降。对10批生巴戟天样品和对应批次的盐巴戟天样品的糖类成分含量进行配对f检验。对给定显著性水平α=0.05,t(0.05/2,10)=2.228,经配对f检验,结果显示,10批样品盐制前后果糖、蔗糖、耐斯糖、蔗果五糖的f值均大于2.228,分析结果差异具有统计学意义(P<0.05),表明巴戟天盐制后果糖、蔗糖、耐斯糖、蔗果五糖的成分发生了显著变化。3巴戟天炮制前后对健脑作用的影响采用SPSS 19.0对实验数据进行独立f检验,与空白组对比,模型组小鼠的水迷宫试验的穿越次数和脑组织内的单胺类神经递质甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺的含量显著减少(P<0.01),水迷宫试验的潜伏期显著增加(P<0.05)。与模型组对比,阳性对照组、生巴戟天高浓度组,盐巴戟天低、中、高浓度组中水迷宫试验的穿越次数和单胺类神经递质甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺的含量均显著增加(P<0.05),水迷宫试验的潜伏期显著减少(P<0.05)。对生巴戟天组与盐巴戟天组中甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺的含量进行比较,结果发现,盐巴戟天高度组小鼠三种单胺类神经递质的含量显著低于生巴戟天高浓度组小鼠,两组间存在显著差异(P<0.01)说明巴戟天盐制后健脑作用更加显著。结论:1盐巴戟天最佳炮制工艺优选均匀试验法,可以用于巴戟天盐制工艺的优化。与其他优选工艺的统计学方法相比,能够有效减少巴戟天盐制工艺优选的实验次数,提高实验效率。均匀设计实验法更简单、方便,能够有效地优选出最佳的巴戟天盐制工艺。本次实验最终确定最佳的巴戟天盐制工艺为:食盐水浓度120 mL(含食盐2g),浸润时间为8.5 h,蒸制时间为5.5 h。2巴戟天盐制后糖类成分比较巴戟天盐制前后寡糖类成分的含量差别明显,盐巴戟天耐斯糖、蔗果五糖成分含量显著减少,单糖类成分的含量显著增加,表明巴戟天盐制过程中巴戟天糖类成分发生了分解,进一步阐明了生巴戟天与盐巴戟天的糖类成分的关系。3巴戟天盐制前后对健脑作用的影响通过行为学实验与脑组织单胺类神经递质的检测结果,发现生巴戟天水提物与盐巴戟天水提物对老年痴呆小鼠的记忆学习能力有一定的改善作用,且盐巴戟天水提物对老年痴呆小鼠的记忆学习能力改善作用更明显。表明巴戟天炮制后健脑作用显著增强,其药理作用的变化与其盐制后糖类成分分解具有有密切联系。
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