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目的:树突状细胞(DCs)是体内功能最强大的抗原递呈细胞,可从非淋巴组织迁移至次级淋巴器官,刺激初始型T细胞的增殖活化,并向Th1细胞转化,产生急性排斥反应。Toll样受体(TLRs)在机体天然免疫中起重要作用,可特异性识别病原相关分子模式(PAMPs),不但在激活固有免疫中发挥着重要作用,而且在诱导和调节适应性免疫中也具有重要意义,是连接固有免疫及适应性免疫的重要桥梁。TLRs可表达于DCs细胞表面,介导DCs成熟,通过一些列反应使机体产生急性排斥反应。研究发现TLR4、9参与急性排斥反应,但研究结果均集中在免疫效应器官(即移植物本身),未见对免疫系统其表达情况的研究。目前对TLR10的研究还比较少。故我们希望通过大鼠皮肤移植急性排斥模型,初步研究免疫系统中的中枢免疫器官胸腺、外周免疫器官脾脏和淋巴结中TLR4、9、10 mRNA的表达情况并初步探讨胸腺、脾脏、淋巴结三者之间在急性排斥中的相互关系,为下一步对移植模型中DCs亚群的TLRs表达情况的研究提供实验基础。 方法:①制备大鼠皮肤移植模型:准备好Wistar大鼠15只,SD大鼠15只用于制备异基因组(Wistar→SD)皮肤移植模型;SD大鼠30只用于制备同基因组(SD→SD)皮肤移植模型;SD大鼠15只用于制备假手术组(sham operation group,SHAM)皮肤移植模型;SD大鼠9只作为正常组(Normal)大鼠。②于皮肤移植手术后第1、4、7、10和14天取大鼠胸腺、脾脏、淋巴结用于检测TLR4、9、10 mRNA的表达情况。 结果:⑴胸腺中TLR4、9、10的mRNA表达变化。对比各组分析,移植组的TLR4、9、10 mRNA表达均低于假手术组大鼠;从时间点分析,TLR4、9、10的表达量呈现逐渐升高,到术后第7天达到峰值,之后又逐渐下降的趋势;异基因移植(W→S)组的表达水平较同基因移植(S→S)组高些;TLR4、9、10 mRNA的表达水平和趋势基本相当。⑵脾脏中TLR4、9、10 mRNA的表达变化情况。对比各组分析,移植组的TLR4、9、10 mRNA表达水平高于假手术组大鼠;从时间点分析,TLR4、9、10的表达量一开始低于正常,后逐渐升高;异基因移植组的表达水平较同基因移植组稍高些;TLR4、9、10 mRNA的表达水平和趋势基本相当。⑶淋巴结中TLR4 mRNA的表达变化情况。对比各组分析,异基因组表达水平高于同基因组,而假手术组介于二者之间;从时间点分析,TLR4、9、10 mRNA表达水平均有升有降,表现趋势不完全一致,总体来看异基因组呈现波动上升,同基因组表现震荡平稳,而假手术组表现波动下降;TLR4、9、10 mRNA的表达水平和趋势基本相当。 结论:①通过对大鼠皮肤移植模型的中枢及外周免疫器官中TLR4、9、10mRNA的研究,我们推测:TLR4、9、10参与急性排斥反应,作用为促进移植排斥反应,且三者之间可能存在协同效应;免疫器官间存在复杂的调控体系,胸腺在急性排斥反应中主要作用可能为免疫抑制,脾脏和淋巴结也参与免疫调节,并同其它免疫器官和免疫效应器官共同作用以维持机体的免疫平衡。②对免疫器官中TLR4、9、10 mRNA的表达做了初步的研究,为进一步在皮肤移植急性排斥反应模型中研究DCs亚群的TLRs的表达和功能特点提供了实验基础。