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乳酸菌作为一种天然抗氧化剂,以其安全、有效的特性受到越来越多的关注。由于青藏高原“强紫外、低氧”的气候环境特点,因此本地乳酸菌可能具有适应这种极端环境的抗氧化胁迫能力。本试验以从青藏高原传统发酵牦牛酸奶和天然垂穗披碱草青贮饲料中分离鉴定的34株乳酸菌以及标准菌Lactobacillus rhamnosus GG(LGG;ATCC53103)为试验菌株,通过体外抗氧化试验初步筛选出具高抗氧化活性乳酸菌,并探讨乳酸菌的抗氧化酶学机理。将初步筛选的具高抗氧化活性乳酸菌进行体外益生特性评价和小鼠衰老模型的体内抗氧化试验,进一步验证筛选菌株的抗氧化功能及特性,试验结果如下。(1)34株乳酸菌都具有一定的H2O2耐受能力,其中有11株乳酸菌能在H2O2浓度为2.0 mmol/L时生长良好,具有很强的H2O2耐受能力。初步筛选的11株乳酸菌都具有一定的自由基清除能力,其中菌株24-7和BX62表现突出。在菌体或无细胞提取物浓度为1010 CFU/mL时,菌株24-7和BX62对DPPH自由基的清除率分别为73.88%和75.17%;对OH自由基的清除率分别为82.46%和81.13%;对O2-自由基的清除率分别为62.75%和65.85%。(2)在H2O2耐受和OH自由基清除试验中表现最突出的菌株24-7具有最强的GSH-Px活性;而在O2-自由基清除试验表现最突出的菌株BX62具有最强的T-SOD活性。进一步证实GSH-Px主要通过清除H2O2和OH自由基来表达抗氧化活性,而SOD主要通过清除O2-自由基来表达抗氧化活性。乳酸菌的T-AOC活性表现为发酵上清液高于1010 CFU/mL无细胞提取物;T-SOD活性表现为1010CFU/mL无细胞提取物高于发酵上清液;乳酸菌发酵上清液没有检测出GSH-Px活性,而无细胞提取物具有较高的GSH-Px活性。(3)模拟胃肠道试验中,在pH 2.5的模拟胃液中消化3 h后,有7株乳酸菌的存活率在90%以上,其余乳酸菌的存活率也都在87%以上。而在人工肠液消化24 h后,菌株3-4、24-7、BX62和LGG的存活率仍在60%以上,表现出对模拟肠液的良好耐受性。耐胆盐试验中,所有乳酸菌在含0.3%胆盐的MRS培养基中生长的迟滞期都在3 h内,说明都具有一定的耐胆盐能力,其中菌株XS14、BX62和LGG表现突出,迟滞期都在2 h内。疏水性试验中,菌株BX62和LGG的疏水能力最强,分别为43.09%和46.15%。以外,菌株21、24-7、XS40、BT36也具有较强的疏水能力(4)L.casei 24-7和L.plantarum BX62的摄入能显著提高衰老模型小鼠的体重增加量。对衰老模型小鼠的脾和肾比重影响不大,能有效缓解D-半乳糖对小鼠脑和肝脏的损伤。与衰老模型组对比,乳酸菌组小鼠肝脏、脑组织和血清的T-SOD、GSH-Px、T-AOC活性和MDA含量都有了显著的提高,其中,肝脏的GSH-Px、T-AOC活性,脑组织和血清的T-SOD活性甚至能回到正常水平。以上试验结果说明本研究筛选的两株乳酸菌L.casei 24-7和L.plantarum BX62具有高抗氧化活性和体内益生特性,可成为益生菌候选菌株,具有潜在的应用价值。