论文部分内容阅读
微小RNA(microRNA)是一类长度大约22个碱基,在进化中高度保守的非蛋白质编码的內源性小分子RNA。它是一种具有强大调节作用的新型基因分子。microRNA可以在所有细胞类型中表达,在细胞的生长、分化、凋亡中均参与其中。作为一个重要的微小RNA,miR-146家族在各种生理及病理过程中参与重要的转录后调节已经被广泛报道。miR-146a在糖尿病性视网膜病变的过程中的表达变化也有相关的报道。根据文献报道不能确定miR-146a在糖尿病性视网膜病变的表达变化情况。目的:本研究通过对糖尿病性视网膜病变的不同分期miR-146a表达进行对比,初步研究糖尿病性视网膜病变的分期同miR-146a表达变化的关系,探讨miR-146a能否成为糖尿病性视网膜病变的诊断工具。方法:1.对已确诊的2型糖尿病患者根据眼底病变的情况进行分类,从0期至Ⅳ分为5组,共33例,排除眼底病变不同各组患者无差异。同时选取健康人对照组。对目的组及对照组进行静脉采血。2.分离静脉血,利用试剂盒提取标本血浆中的microRNA。对取得microRNA利用Ploy A进行加尾,并对加尾的产物进行反转录。采用实时荧光定量PCR法检测样本miR-146a的相对表达含量。3.对实时荧光定量PCR的产物进行电泳检测,验证所得到的产物是否为目的产物。4.统计学整理数据,应用统计学软件SPSS19.0处理数据,采用单因素方差分析实验结果。结果:1.根据电泳结果分析,荧光定量PCR的产物在目的条带范围,符合实验要求。证明引物具有特异性。2.溶解曲线和扩增曲线结果也证明引物的特异性好,符合实验要求。引物的扩增效率同样在可信区间范围内。3.统计学分析miR-146a的相对表达含量,将糖尿病性视网膜病变的0期与健康对照组相比,血浆miR-146a的表达水平有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05)。糖尿病性视网膜病变Ⅰ~Ⅳ期分别与健康对照组相比,miR-146a的表达水平有下降趋势,但无统计学差异(P>0.05)。糖尿病性视网膜病变各分期之间差异无统计学差异(P>0.05)。结论:1.本实验检测miR-146a表达在糖尿病视网膜病变各组之间,目的组与对照组之间,未能得出统计学差异,尚不能确认miR-146a在糖尿病视网膜病变的表达情况。2.不同糖尿病患者及健康人之间miR-146a表达的个体差异较大。3.在本研究所检测的样本中未能体现miR-146a的表达与糖尿病视网膜病变的发展程度有相关性。miR-146a在糖尿病视网膜病变的表达情况有待于进一步研究。