论文部分内容阅读
化疗药物连续刺激对人肺腺癌细胞株耐药、增殖、转移及凋亡相关蛋白表达的影响 目的：探讨常规化疗药物连续刺激对肿瘤细胞株与耐药、增殖、转移及凋亡相关蛋白表达的影响。 方法：1．通过MTT法分别测定人肺腺癌细胞株LTEP-a-2和SPC-A-1在不同化疗药物（ADM、VP-16、DDP）作用下的IC50～IC10值，建立体外LTEP-a-2和SPC-A-1细胞株的化疗药物连续刺激模型。并利用流式细胞仪方法检测各种化疗药物单药及联合药物刺激后细胞所处的分裂周期。 2．人肺腺癌细胞株经ADM、VP-16、DDP单药及联合用药连续刺激，以及不同剂量浓度（分二个剂量梯度）连续作用，并分组。 3．记录每组细胞在不同药物及不同药物浓度的刺激下LTEP-a-2和SPC-A-1的倍增时间。 4．应用流式细胞仪分别检测各组每次药物刺激后耐药相关蛋白MDR1、MRP、LRP、ref-1、NF-KappaB、MDM2、GST、TS、MT、P27以及增殖相关蛋白erbB-2、c-myc，转移相关蛋白erbB-2、MMP-2、P53和凋亡相关蛋白Bax、bcl-2、P53的阳性细胞数及平均荧光强度，以此推算出不同药物在不同浓度下连续作用细胞株后以上各蛋白表达的细胞数、平均表达量、总表达量，同时设对照组。并检测各组每次药物刺激后的细胞周期，应用multi-cycle软件计算细胞的凋亡率。 结果：1．LTEP-a-2细胞株的所有药物的IC50、IC40浓度组以及DDP的IC30、IC20组、联合药物的IC30组在第一次加药后细胞全部死亡，无法进行下一周期药物刺激，最后剩下可以连续刺激的组为ADM的IC20、IC30组，DDP的IC5、IC10组，VP-16的IC20、IC30组，以及联合药物的IC10、IC20组；SPC-A-1细胞株的所有药物的IC50、IC40浓度组以及DDP和联合药物的IC30组在第一次加药后细胞也全部死亡，可以连续刺激的组为ADM和vP一16的xCZ。、xe3。组，DDP和联合药物的IC10、Ie20组。DDP刺激细胞后，多数细胞被阻断于GZ期，并随着药物浓度的增加被阻断于GZ期的细胞增多;联合药物同时刺激细胞后，细胞被杂乱地阻断于各个分裂周期之中，不同浓度药物阻断细胞于各分裂周期的比例亦不相同。 2.两个细胞株的耐药相关蛋白MDRI、 MRP、LRP、ref-1、NF一K即p犯、MDMZ、osT、Ts、MT、p27随着培养时间的延长各项检测指标其阳性细胞的百分数、平均荧光强度及总荧光强度均呈下降趋势。LTEP一a一2细胞株的高剂量各组以上各项指标基本上均随刺激次数的增加呈下降趋势，第三次刺激后高剂量各组MDRI的表达均低于对照组;而低剂量各组的检测指标则有升有降，无一定规律，各检测指标每个都有1一3个组第三次刺激后其蛋白表达高于第二次刺激后的蛋白表达，第三次刺激后低剂量各组MDRI的表达均高于对照组。第三次刺激后所有药物组MRP、LRP、MDMZ、GST、TS、MT、P27的表达高于对照组。SPC一A一1细胞株进行了二次药物刺激的组为所有的低剂量组和DDP的高剂量组，DDP的高剂量组除了GST、P27的表达呈上升趋势外，其余各蛋白的表达呈下降趋势;而低剂量各组除了MRP的表达均呈下降趋势外，其余各蛋白的表达均有2一4个组呈上升趋势。 3 .LTEP一a一2细胞株中高药物浓度组细胞增殖周期长，增殖相关蛋白erbB一2高剂量各组表达量均呈下降趋势，低剂量各组的检测指标则有升有降，无一定规律，且在第三次给药后其总量明显高于对照组;SPC一A一1细胞株中DDP高剂量组erbB一2的表达量的下降幅度要高于低剂量各组。而c一myc的表达在这二个细胞株中无一定规律。 4.LTEP一a一2细胞株中转移相关蛋白的B一2高剂量各组表达量均呈下降趋势，低剂量各组的检测指标则有升有降，无一定规律，且在第三次给药后其总量明显高于对照组;SPc一A一1细胞株中DDP高剂量组erbB一2的表达量的下降幅度要高于低剂量各组。而MMP一2、P53高低剂量各组的表达在这二个细胞株中无一定规律，但是LTEP一a一2细胞株在第三次给药后其总量明显高于对照组。 5.LTEP一a一2细胞株中凋亡相关蛋白Bax、bcl一2和突变型P53的表达 一2-药物组均高于对照组，但这三种蛋白表达的变化与药物浓度无关;SPC一A一1细胞株中这三种蛋白的表达无一定规律。同时药物连续刺激这二个细胞株后，药物组细胞的凋亡率也均高于对照组，而且高剂量组的细胞凋亡率高于低剂量组，联合药物组的细胞凋亡率高于单一药物组。 结论:1.不同细胞株受同一种化疗药物刺激以及同一细胞株受不同药物或同种药物的不同浓度刺激时，细胞所诱导的耐药、增殖、转移以及凋亡相关蛋白的表达也不同，提示在不同时间不同的细胞在不同药物或同种药物不同剂量的刺激下，所产生的耐药、增殖、转移、凋亡机制是不同的，因此个体化治疗是关键。 2.小剂量化疗药物连续刺激比大剂量更易诱导细胞耐药、增殖及转移，大剂量化疗优于小剂量化疗，联合用药优于单一用药。 3.进行联合化疗时，应先选用细胞周期非特异性化疗药将细胞阻断于一定的细胞分裂周期内，然后再用一定的细胞周期特异性化疗药物才能达到最大限度杀灭直流细胞