【摘 要】
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目的胶质瘤主要发生在大脑和胶质组织,是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤。其中胶质母细胞瘤(GBM)是最差的类型,GBM通过增强细胞粘附,炎症反应以及新血管的形成增加胶质瘤的恶性程度。根据不同的生物学、影像学和临床特征,GBM分为神经型、前神经型、经典型和间叶型4种亚型。间叶型亚型(MES)是一种更恶性的形式,有更高的复发、转移和血管增加的倾向。近年来,中枢神经系统肿瘤被重新分类,这导致了个性化治疗和预
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目的胶质瘤主要发生在大脑和胶质组织,是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤。其中胶质母细胞瘤(GBM)是最差的类型,GBM通过增强细胞粘附,炎症反应以及新血管的形成增加胶质瘤的恶性程度。根据不同的生物学、影像学和临床特征,GBM分为神经型、前神经型、经典型和间叶型4种亚型。间叶型亚型(MES)是一种更恶性的形式,有更高的复发、转移和血管增加的倾向。近年来,中枢神经系统肿瘤被重新分类,这导致了个性化治疗和预后因素指导的治疗决策的范式转变。纵然在手术、放疗和化疗之后,胶质瘤患者的生存时间也只增加了几个月。所以,紧急不能等待地需要准确的预后预测和新的治疗靶点来治疗胶质瘤。因此,我们推测MES相关基因的检测对判断预后具有重要意义。TCGA和CGGA作为国外肿瘤数据库和国内胶质瘤数据库,提供了大量的临床样本。结合与之匹配的临床信息以及基因表达数据,我们对MES相关基因作为胶质瘤的预后生物标志物和开发更准确的治疗过程进行更深的研究。方法利用TCGA数据库和Ivy GAP数据库获取MES相关基因交集,得到21个基因。从TCGA数据库和CGGA数据库得到临床样本信息以及RNA序列信息。基因差异分析比较TCGA胶质瘤样本和GTEx正常样本,得到15个差异基因。单因素Cox分析用来判断15个基因是否对预后都有意义,挑选其中有意义的6个基因。R语言软件对各个基因表达情况和临床样本之间采取Lasso回归方程构建危险系数模型。根据危险系数中位数将临床样本分为高低危险组。KaplanMeier生存分析用于判断两组之间生存差异,单因素和多因素分析危险系数是否能作为独立预后因素,AUC曲线分析危险系数作为预后因素的特异性和敏感性。GSEA对相关基因进行功能比对,预测相关基因的功能和通路。根据文献报道,挑选了其中一个基因FCGR2A,si RNA用于构建FCGR2A沉默模型,利用q RTPCR判断FCGR2A以及EMT相关基因在细胞中的表达情况。采用Transwell迁移和侵袭实验检测FCGR2沉默之后对胶质瘤细胞迁移,侵袭的作用的影响。克隆试验和MTT试验用于判断沉默之后的细胞增殖能力。Western-Blot用于检测沉默FCGR2A后,MES相关标志基因的表达情况。结果(1)基因差异分析成功筛选15个基因在正常组和胶质瘤组之间有差异(2)单因素分析挑选其中6个基因可作为独立的预后分析。(3)Lasso回归分析成功构建了危险系数模型。(4)利用生存分析风险模型可判断预后,并可单独作为预后因素。(5)GSEA功能分析发现MES相关基因跟上皮-间质转化、血管生成、炎症和缺氧有关。(6)沉默FCGR2A后,胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭能力下降。(7)沉默FCGR2A后,EMT相关标志基因和蛋白表达都降低。结论我们确定了这6个与MES相关的基因是胶质瘤患者的潜在预测标记或治疗靶点。开发了一个基于6个MES相关基因表达的危险系数模型,可以更好地预测胶质瘤的OS。并进行了功能分析,发现这六个基因与肿瘤的发展过程息息相关特别是EMT相关过程。研究了FCGR2A对胶质瘤的增殖、迁移侵袭的影响,发现si RNA转染该基因后,胶质瘤增殖,迁移侵袭能力全部受到阻遏。同时沉默FCGR2A后,EMT相关的基因和蛋白都表达降低,说明可能FCGR2A通过影响上皮间质转化影响肿瘤发展。我们进一步证实这些基因在神经胶质瘤中起重要作用。
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