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背景和目的恶性黑色素瘤(malignant melanoma)是来源于黑色素细胞的恶性肿瘤。虽然我国发病率较低，为全身恶性肿瘤的1％～2％，但其恶性程度高，易发生远处转移，预后差，大多数患者在10年内死亡。它对常规的辅助放疗、化疗不敏感，疗效差。随着人们对恶性黑色素瘤病因的研究，我们认识到只有寻找到新的作用靶点治疗该病，才能提高疗效，改善预后。目前证实直径超过1-2mm~3的实体肿瘤生长依赖于肿瘤新生血管的生成，它是决定恶性黑色素瘤大小、转移、复发和预后的重要因素。1971年，Folk man首先提出肿瘤的持续生长和转移有赖于新生血管形成的假说，之后，针对肿瘤血管内皮的治疗方法和治疗药物不断涌现。随着Avastin的上市，血管抑制剂成为治疗恶性肿瘤的热点。反应停(沙利度胺，酞咪哌啶酮，thalidomide)曾用于镇静止吐，1961年因其可导致胎儿海豹畸型而被禁用。近年来发现其具有抑制血管生成，免疫调节等作用，而用于多发性骨髓瘤等多种肿瘤的治疗。但国内尚无反应停治疗恶性黑色素瘤的文献报道，故本文观察了反应停对小鼠B16黑色素瘤的抑制作用，并探讨其作用机制，为反应停更好的应用于临床提供实验依据。方法1．建立小鼠B16黑色素瘤模型，将荷瘤小鼠随机分为5组，每组10只：反应停高、中、低剂量组(按400mg／kg／d、200mg／kg／d、50mg／kg／d的标准，用0.2ml生理盐水溶解不同浓度反应停灌胃，连续给药14天)；阳性对照组(经腹腔注射CTX 100mg／kg／d，仅第一天给药)；阴性对照组(等容量无菌生理盐水灌胃，连续14天)。隔日测肿瘤体积，第15天处死荷瘤鼠，剥离瘤体称重，计算抑瘤率。同样方法建立模型，分组，给药，记录各组荷瘤鼠平均生存时间。2．留取肿瘤组织标本，应用HE染色法对反应停各剂量组及阴性对照组的肿瘤组织进行病理形态学对比观察。3．免疫组化法检测反应停各剂量组及阴性对照组肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达。4．RT-PCR法检测反应停各剂量组及阴性对照组VEGF mRNA的表达。5．应用统计软件SPSS10.0进行统计学处理，统计方法采用方差分析。以α=0.05作为检验水准。结果1．反应停低、中、高剂量组平均瘤重(2.1307±0.5018g、1.9813±0.6578g、2.0986±0.5549g)均小于阴性对照组(2.4995±0.8081g)，但差异无统计学意义(P＞0.05)；反应停各剂量组之间平均瘤重比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。CTX组平均瘤重(0.4208±0.0719g)明显小于阴性对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。抑瘤率分别为：反应停低剂量组14.75％，中剂量组20.73％，高剂量组16.04％，CTX组83.17％。2．反应停低、中、高剂量组及CTX组荷瘤鼠的平均生存时间(27.3±5.2天、29.8±3.3天、25.6±3.4天、34.1±4.2天)明显长于阴性对照组荷瘤鼠的平均生存时间(21.5±3.6天)，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，但反应停各剂量组之间荷瘤鼠的平均生存时间相比，差异无统计学意义(P＞0．05)。CTX组荷瘤鼠的平均生存时间长于反应停各剂量组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。3．HE染色组织病理学观察可见反应停各剂量组有不同程度的肿瘤坏死区。4．免疫组化法观察到反应停低、中、高剂量组的VEGF平均灰度值(172.33±5.1109、129.43±7.2954、124.68±8.6643)低于阴性对照组。(183.29±2.2651)，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。反应停高、中剂量组VEGF平均灰度值低于低剂量组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。高、中剂量组之间VEGF平均灰度值差异无统计学意义(P＞0.05)。5．免疫组化法计数反应停低、中、高剂量组MVD(11±4.8条、9±2.3条、7+2.1条)少于阴性对照组(23±5.7条)，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。但反应停各剂量组之间微血管计数差异无统计学意义(P＞0.05)。6．RT-PCR法检测反应停低、中、高剂量组VEGF mRNA的相对表达量(0.23±0.113、0.13±0.079、0.09±0.068)低于阴性对照组(0.35±0.105)，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。反应停高、中剂量组VEGF mRNA的相对表达量低于低剂量组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。高、中剂量组之间VEGF mRNA的相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。结论1．单独应用反应停不能抑制小鼠B16恶性黑色素瘤生长。2．反应停可延长荷瘤小鼠的平均生存时间。3．反应停可抑制小鼠B16恶性黑色素瘤VEGF的表达。4．反应停可减少小鼠B16恶性黑色素瘤肿瘤微血管密度。