【摘 要】
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本研究的目的是:1.研究LPS介导KC的生物学效应；2.探讨清肝活血方及其拆方对LPS介导KC生物学效应的影响和对信号转导作用的环节。 方法：1.原代分离KC，加入不同剂量，作用不同时
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本研究的目的是:1.研究LPS介导KC的生物学效应；2.探讨清肝活血方及其拆方对LPS介导KC生物学效应的影响和对信号转导作用的环节。
方法：1.原代分离KC，加入不同剂量，作用不同时间的LPS，观察TNF-α的表达情况。2.制备清肝活血方及其拆方含药血清，以ELISA、RT-PCR、Western方法检测清肝活血方及其拆方含药血清对KC表达TNF-α、膜受体CD-14、TLR4、ERK1/2、NF-κB和AP-1的影响。
结果：
1.正常培养的KC在加入LPS后，TNF-αmRNA在1-2h表达最明显，100μg/L分泌量最明显；TNF-α蛋白在2h开始明显增加，6h到达峰值；用1mg/L刺激分泌到达峰值。
2.清肝方可以下调KC膜受体CD-14、TLR4，通过抑制磷酸化的ERK来调节核因子AP-1的表达。活血方可以调节KC膜受体TLR4受体表达，下调P-ERK，抑制核因子NF-κB的表达。清肝活血方可以调控KC膜受体CD-14、TLR4，抑制磷酸化ERK，抑制核因子NF-κB、AP-1的表达。
结论：
1.LPS激活KC后产生大量细胞因子TNF-α，TNF-α的基因、蛋白表达随LPS作用时间、剂量的不同而不同。
2.清肝活血方及其拆方含药血清通过影响LPS介导KC激活信号通路的多环节来发挥药物作用，其作用机理是调节细胞因子网络的异常功能状态，抑制TNF-α的产生，从而起到保护肝细胞的作用。
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