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木霉菌(Trichoderma spp.)是一类重要的生防真菌资源,在农作物病害的绿色防控中具有重要的发展前景和应用价值。木霉在与宿主植物的互作、促生及生物防治作用的研究将为高效、稳定的木霉生防菌制剂的研发和利用提供重要的理论依据。根癌农杆菌介导(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)的绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)基因的转化方法为微生物互作及与宿主植物互作的研究提供了一个强有力的工具。钩状木霉(Trichoderma hamatum)ACCC31649是一株优秀的生防菌株,前期研究表明该菌株具有显著促进黄瓜植株生长的特性。本研究通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,建立了生防钩状木霉的遗传转化体系,筛选获得了稳定遗传的转化子T.hamatum-GF21。利用荧光显微技术揭示了T.hamatum-GF21在辣椒组织及辣椒根际土壤中的定殖能力和特点,并进一步阐明了钩状木霉菌株对辣椒植株的促生作用和对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)生防作用的初步研究。本论文的主要研究结果如下:1、根癌农杆菌介导钩状木霉的转化体系的构建及稳定遗传的转化子筛选。本研究通过DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)和卡氏白(Calcoflour White)两种染料对钩状木霉ACCC31649的菌丝及分生孢子的细胞核进行组合染色,结果表明其为单核细胞;优化ATMT转化的乙酰丁香酮浓度、分生孢子悬浮液浓度、诱导培养时间和共培养时间等转化条件;获得了钩状木霉的GFP标记转化子100个,通过连续继代的潮霉素抗性筛选和PCR检测,筛选了10个强绿色荧光和稳定遗传的转化子。此外,比较了GFP标记转化子与野生型菌株其在形态学特征、生长速率、产孢量和生物量等方面的一致性。2、钩状木霉菌株在辣椒组织中定殖特点及其对辣椒幼苗的促生作用。通过木霉孢子液灌根接种4叶期辣椒幼苗,标记菌株T.hamatum-GF21在根际土壤中呈现“先增后降”的数量变化趋势;辣椒组织切片的荧光显微连续观察表明,辣椒根、茎和叶组织中都检测到钩状木霉菌株的定殖。30天后,钩状木霉处理与水处理相比,辣椒植株的株高增长13.52%,根长增长16.19%,鲜重和干重分别增加了43.75%和45.28%,而且野生型菌株与GFP标记菌株对辣椒的促生作用没有显著差异。3、钩状木霉对辣椒疫霉菌的生防作用的初步研究。通过平板对峙实验结果表明,钩状木霉菌株对辣椒疫霉菌生长抑制率为40.87%;抑菌实验结果表明钩状木霉发酵液能够强烈抑制辣椒疫霉菌的生长,并且初步研究表明钩状木霉菌能够通过对辣椒疫霉菌菌丝缠绕和分泌细胞壁裂解酶类而产生抑制作用。通过辣椒果实的病原接种实验结果表明,钩状木霉对辣椒疫病的防治效果为19.01%。