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目的:利用不同方法判断人精子甘露糖受体(hsMR)的存在,并通过亲和层析技术分离纯化该受体,同时探讨其与血清淀粉样蛋白P成分(SAP)、HSP70家族分子(HSP70、HSPA2、HSC70),以及人巨噬细胞甘露糖受体(CD206)的关系,旨在明确该受体分子特性,为进一步研究其在人类受精中的作用奠定基础。方法:收集正常人精子,提取人精子全蛋白;以DMA为探针,进行Dot-Blot和Western Blot实验,并用DMA-FITC标记结合人精子蛋白后的甘露糖-琼脂糖凝胶颗粒(mannose-Sepharose4B)(简称DM-beads,以下同);利用亲和层析技术分离纯化人精子甘露糖受体;分别用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70和CD206的抗体为探针标记结合人精子蛋白后的DM-beads,并用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70的抗体在不同状态人精子进行原位荧光标记。结果:Dot-Blot和Western Blot以及DMA-FITC标记结合人精子蛋白后的DM-beads结果均显示人精子蛋白中存在hsMR能与DMA特异性结合;WesternBlot结果显示获能人精子蛋白中hsMR分子量约为72KDa。亲和层析柱填料电泳银染出现多条细密条带,提示人精子中不止一种蛋白质分子能与甘露糖结合。不同探针标记结合洗涤去精浆人精子蛋白、获能人精子蛋白合后的DM-beads显示,人精子蛋白中存在HSP70、HSPA2和HSC70,且均具有DM结合活性.此外,anti-SAP标记结合洗涤去精浆人精子蛋白后DM-beads出现绿色荧光,而结合获能人精子蛋白后DM-beads几乎未见绿色荧光,表明SAP存在于洗涤去精浆精子蛋白中,获能人精子蛋白中SAP标记阴性;anti-CD206-Biotin标记结合人精子蛋白后DM-beads均未见有特异性荧光出现,表明人精子蛋白中不存在CD206分子。不同探针标记不同状态人精子显示,SAP存在于新鲜洗涤人精子表面,定位于尾部;HSP70主要见于顶体反应后人精子颈-中段;HSPA2在获能人精子颈-中段可见,在顶体反应后精子多见于赤道段和顶体后区,可见典型bar状结构,颈段隐约可见;HSC70主要见于赤道段和顶体后区,可见典型bar状结构,颈段隐约可见,偶见全头部表达。结论:人精子甘露糖受体(hsMR)是人精子中具有甘露糖结合活性的蛋白质,至少包含两类分子:(1)血清淀粉样蛋白P成分(SAP);(2)热休克蛋白70家族分子(HSP70、HSPA2和HSC70)。分布于人射出精液中的精子尾部的hsMR,主要成分是SAP。在精子获能过程中SAP被去除,因此判断其为精子尾的表在蛋白;分布于人精子头部至精子尾中段的hsMR,主要成分是热休克蛋白70家族分子(HSP70、HSPA2和HSC70)。其中,HSP70主要分布于顶体反应后精子的颈-中段;HSPA2主要分布于获能精子颈-中段和顶体反应后精子头赤道段及(或)顶体后区;HSC70主要分布于顶体反应后精子头的赤道段及或顶体后区,提示HSPA2和HSC70可能在受精中有重要作用。人精子中不存在CD206蛋白(人巨噬细胞甘露糖受体,hmMR),证明hsMR虽然与hmMR一样具有甘露糖结合活性,但两者不是同一种分子。本研究关于hsMR与HSP70家族分子关系的发现国际上尚未见报道。