小鼠皮肤损伤后表皮干细胞标志物表达的时间相关性研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ljkstar007
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目的:损伤时间推断是法医工作者研究的重点和难点,当前研究主要集中在皮肤损伤和脑损伤模型基础上的基于蛋白、细胞因子等物质表达变化的时间相关性研究。皮肤损伤的情况在案件中最为多见,皮肤损伤时间推断就成为法医工作进行突破的关键,皮肤愈合最为重要的就是表皮的愈合,利用表皮干细胞(epidermal stem cell,ESC)在皮肤表皮愈合过程中的变化来进行损伤时间推断的研究成为一种可能。表皮干细胞标志物β1整合素(Integrinβ1)、P63、角蛋白19(keratin 19,K19)是其重要的表面标记物,本研究通过建立小鼠皮肤酸性烧伤和碱性烧伤两种皮肤损伤动物模型,研究其损伤后不同时间表皮干细胞标志物β1整合素、P63、K19的表达变化规律,分析其与损伤时间的相关性。方法:利用碱性物质Na OH和酸性物质HCL分别建立小鼠皮肤Ⅱ度(浅Ⅱ度-深Ⅱ度)酸、碱性烧伤动物模型,在损伤后1d、2d、3d、5d、7d、10d、12d、14d对损伤处皮肤取材,并进行肉眼观察、HE、免疫组化染色等组织病理检验,比较损伤后不同时间表皮干细胞标志物β1整合素、P63、K19表达变化情况,进行统计学分析,分析三个标志物表达变化与皮肤损伤时间的相关性。结果:采用5mol/L的氢氧化钠(Na OH)作用于小鼠背部皮肤,能够形成小鼠皮肤Ⅱ度(浅Ⅱ度-深Ⅱ度)烧伤。伤后皮肤经过愈合,从1d组开始,各时间点的表皮厚度逐渐增加,到7d到达高峰,之后表皮厚度逐渐降低,各实验组与对照组的表皮厚度存在显著差异(P﹤0.05)。对照组皮肤表皮干细胞标志物P63在表皮基底层见少量阳性表达,阳性细胞呈单层排列,实验组P63阳性表达细胞数增多,主要分布在表皮基底层、棘层和颗粒层,P63蛋白表达逐渐增多,至5d时达到峰值,后逐渐降低,各实验组与对照组的P63阳性细胞计数值存在显著差异(P﹤0.05);实验组K19和β1在表皮细胞有明显阳性表达,两个标志物的平均光密度值随时间的增加呈现早期升高,3d组开始逐渐降低,5d组及以后保持较低水平。采用6mol/L的盐酸(HCL)作用于小鼠背部皮肤,能够形成小鼠皮肤Ⅱ度(浅Ⅱ度-深Ⅱ度)烧伤。伤后皮肤经过愈合,从1d组开始,各时间点的表皮厚度逐渐增加,到10d到达高峰,之后表皮厚度逐渐降低,各实验组与对照组的表皮厚度存在显著差异(P﹤0.05)。对照组皮肤表皮干细胞标志物P63在表皮基底层见少量阳性表达,实验组P63阳性表达细胞数增多,主要分布在表皮基底层、棘层和颗粒层,P63蛋白表达逐渐增多,至10d时达到峰值,后逐渐降低,实验组与对照组的P63阳性细胞计数值存在显著差异(P﹤0.05);实验组K19和β1在表皮细胞有明显阳性表达,两个标志物的平均光密度值随时间的增加呈现早期略升高,3d组后降低的变化,5d组及以后保持较低水平。结论:1.酸、碱性烧伤后皮肤愈合过程无明显不同,表皮明显增厚,在7d或10d达到高峰,可以结合表皮厚度的变化来推测损伤时间。2.表皮干细胞在皮肤损伤后表皮的愈合过程中发挥重要作用,β1整合素、P63、K19均有阳性表达。3.β1整合素和角蛋白19在表皮愈合过程中,愈合早期增加明显,可以帮助我们推断损伤早期时间,但愈合中晚期表达变化与损伤时间相关性不明显。4.表皮干细胞标志物P63在表皮愈合过程中呈先增加后降低的变化趋势,与损伤时间存在相关性,可以为损伤时间推断提供帮助。
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