利用原位杂交方法研究花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生过程中Pax6基因的表达

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以无尾两栖类动物花背蟾蜍(Bufo Raddei Strauch)蝌蚪为实验材料,通过基因克隆、原位杂交的方法研究花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生过程中Pax6(Paired box6)基因表达的时空特点。实验结果表明:花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生前期,虹膜背缘和腹缘的色素细胞发生去分化以及细胞增殖,Pax6基因在虹膜背缘和腹缘都有表达;再生晶状体细胞分化时期,Pax6基因在品状体上皮细胞中表达;在晶状体再生过程中,Pax6基因在视网膜,睫状体区域,角膜以及晶状体上皮位置有表达,其中在视网膜中主要是在节细胞层,内核层内侧,外核层边缘区域表达。此实验初步验证:花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生的组织来源是虹膜背缘色素上皮细胞,Pax6基因的表达与晶状体再生的调节作用密切相关。βBl晶状体蛋白是分布在动物品状体内的重要的结构蛋白,Pax6,c-Maf禾口Prox1都可以对βB1晶状体蛋白表达进行调节。实验采用免疫荧光的方法,在花背蟾蜍蝌蚪品状体再生过15天,21天检测pB1晶状体蛋白的表达,结果表明:花背蟾蜍蝌蚪再生晶状体与正常晶状体都表达pB1晶状体蛋白。以上实验研究结果进一步证明了花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生经历了虹膜背缘色素上皮细胞去分化、细胞增殖以及细胞再分化的过程产生新的晶状体,这一再生晶状体与正常的晶状体都表达pB1晶状体蛋白。对比花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生与蝾螈和非洲爪蟾晶状体再生过程,差异性与相似点共存,针对这些差异的进一步研究将有助于我们更好地理解花背蟾蜍蝌蚪虹膜背缘色素细胞转分化形成晶状体的相关理论。
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