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乳腺癌是危害女性健康的第一大恶性肿瘤,根据《2015年中国肿瘤登记年报》数据显示,在中国每一分钟就有6人被诊断为恶性肿瘤,有5人死于癌症,其中女性乳腺癌发病最多,发病率为42.55/10万人,占女性全部恶性肿瘤发病的17.10%,仅2015年中国新增乳腺癌患者高达27.2万人。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是指在乳腺癌中表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2/neu)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)均未在肿瘤中表达的一种肿瘤亚型。TNBC占所有乳腺癌的10%-20%,年轻患者居多,并且在非裔美国妇女中更普遍[1]。TNBC肿瘤通常体积较大,分级较高,在诊断时常具有淋巴结转移,并且在生物学上更具侵袭性[2]。虽然TNBC患者对于术前(新辅助)化疗具有更高的临床反应率,但是比其它乳腺癌亚型的远期复发率更高,预后更差[2,3]。尽管应用辅助化疗这一主要的治疗方法,转移性TNBC患者的5年生存率依然不到30%[3]。PTPN1也称蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)属于蛋白质酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatase,PTP)家族,与蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTK)共同维持酪氨酸蛋白磷酸化的平衡,参与大量生长因子的信号转导途径,在调节细胞的生长、分化、代谢、基因转录和免疫应答等过程中起重要作用[4]。PTPN1基因定位于20q13,此区域与乳腺癌的不良预后相关,所以,进一步分析PTPN1在乳腺癌病因学中所起的功能作用至关重要。Julien等[5,6]发现,PTPN1的缺失可以延迟乳腺肿瘤的发生和发展进程,特异性PTPN1抑制剂在阻碍肺转移方面发挥重要作用。PTPN1可以下调Ras-MAPK和P13K-Akt通路,下调Erb B2/Erb B3活性后,通过其底物酪氨酸残基磷酸化蛋白p62Dok参与Cyclin D1和p27蛋白稳定性的调节。蛋白酪氨酸磷酸酶12,即PTPN12(也称PTP-PEST)是酪氨酸磷酸酶家族中的重要成员之一。PTPN12在乳腺癌细胞中使HER1/EGFR和HER2去磷酸化[7,8]。PTPN12可通过细胞骨架相关蛋白(如桩蛋白或Pyk2)的去磷酸化[9],以及通过调节Src功能抑制细胞迁移。在另一项研究中,TNBC中发现了PTPN12的失活性突变,但在其他乳腺癌亚型中并无发现。此外,PTPN12在培养的人乳腺上皮细胞和与HER1/EGFR,HER2和PDGFR-β的去磷酸化相关的转移小鼠模型中显示肿瘤抑制活性[7]。因此PTPN1、PTPN12可能是人类TNBC治疗的新靶点。目的:检测TNBC组织中PTPN1、PTPN12、EGFR、CK5/6蛋白的表达情况;分析PTPN1与PTPN12蛋白的表达与临床病理特征及预后的关系;以期为TNBC的预后评估以及治疗靶点的选择提供初步的实验理论证据。方法:筛选河北医科大学第四医院病理科2002年1月至2011年12月期间临床病理资料完整的TNBC患者208例为研究对象,患者全部进行根治性手术治疗,所有患者均为女性,且术前均未接受过放疗/化疗及内分泌治疗,以同期距离癌组织5cm以上的癌旁乳腺组织80例为对照组。参照2012年第四版《WHO乳腺肿瘤分类》,由2名有经验的病理医师阅片进行病理分型,参照AJCC第七版乳腺癌TNM分期进行临床分期,采用免疫组化SP法分别检测208例TNBC组织及80例癌旁乳腺组织中PTPN1,PTPN12的表达情况,分析其表达与临床病理特征及预后的关系,并检测208例TNBC组织中EGFR,CK5/6的表达情况与PTPN1,PTPN12的表达的相关性。结果:1患者一般情况:208例TNBC患者中年龄≤50岁的95例,>50岁的113例;乳腺浸润性导管癌161例(77.4%),乳腺髓样癌22例(10.6%),其他类型的乳腺癌25例(12.0%),其中死亡28例,死亡者中乳腺浸润性导管癌20例(71.4%),乳腺髓样癌2例(7.1%),特殊类型的癌6例(21.4%)。T分期为T1期的患者103例,T2期99例,T3期6例,T4期0例。临床分期为Ⅰ期的患者49例,Ⅱ期137例,Ⅲ期22例,Ⅳ期0例。无淋巴结转移者132例,有淋巴结转移者76例。2 TNBC组织和相应癌旁乳腺组织PTPN1蛋白的阳性表达率分别为37.5%(78/208)和31.3%(25/80),PTPN1蛋白在TNBC组织中的阳性表达率与相应癌旁乳腺组织之间,差异无统计学意义(P>0.05)。208例TNBC组织中,PTPN1的表达强度所占比例分别为:37.5%(78/208)患者为高表达,62.5%(130/208)患者为低表达。PTPN1的表达与患者的T分期(χ~2=9.635,P=0.007)、淋巴结转移状态(χ~2=16.255,P=0.000)及临床分期(χ~2=24.303,P=0.000)有关,差异有统计学意义(P<0.05),而与患者的年龄(χ~2=0.069,P=0.792)和病理分型(χ~2=0.377,P=0.539)无关,差异无统计学意义(P>0.05)。3 208例TNBC患者的PTPN12蛋白总阳性表达率低于对照组,TNBC组织和相应癌旁乳腺组织PTPN12蛋白的阳性表达率分别为57.7%(120/208)和92.5%(74/80),差异有统计学意义(P<0.05)。208例TNBC组织中,PTPN12的表达强度所占比例分别为:42.0%(87/208)患者为阴性,26.0%(54/208)患者为弱阳性,28.0%(58/208)患者为阳性,4%(8/208)患者为强阳性。208例TNBC中PTPN12的缺失表达率为42.0%(87/208)。PTPN12的表达与患者的T分期(χ~2=46.175,P=0.000)、淋巴结转移状态(χ~2=25.444,P=0.000)及临床分期(χ~2=16.227,P=0.000)有关,差异有统计学意义(P<0.05),而与年龄(χ~2=0.377,P=0.539)和病理分型(χ~2=5.614,P=0.114)无关,差异无统计学意义(P>0.05)。4 EGFR和PTPN12蛋白的表达水平具有显著的相关性,差异具有统计学意义(χ~2=8.431,P=0.004,rs=-0.200)。5 208例TNBC中,EGFR的阳性表达率为69.2%,CK5/6的阳性表达率为59.6%,EGFR与CK5/6的表达存在关联性(rs=0.377,P=0.000),差异具有统计学意义(P<0.05)。6采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验评估PTPN1表达对乳腺癌患者生存的影响。分析表明,与PTPN1低表达组相比,PTPN1高表达组患者的总生存率更低(χ~2=14.129,P=0.000)。PTPN1表达为阴性的患者的生存时间高于PTPN1表达为阳性的患者,两者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。7采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验评估PTPN12表达对乳腺癌患者生存的影响。PTPN12高表达组患者的总生存率高(χ~2=26.522,P=0.000),其中PTPN12表达为阴性的患者的生存时间低于PTPN12表达为阳性的患者,两者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。8单因素回归分析结果显示:患者的年龄和病理分型对患者总生存期无影响,差异无统计学意义(P>0.05)。患者的T分期、淋巴结转移状态、TNM分期、PTPN1表达及PTPN12表达对患者的总生存期有影响,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示患者的T分期、淋巴结转移状态、TNM分期、PTPN1和PTPN12表达与预后相关。9多因素回归分析结果显示:患者的T分期、淋巴结转移状态、TNM分期对生存期无明显影响,差异无统计学意义(P>0.05)。但PTPN1和PTPN12的表达对患者总生存期有显著影响,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1 PTPN1的表达与患者的年龄和病理分型无关,而与T分期、淋巴结转移状态和TNM分期之间呈正相关性。PTPN1高表达组患者的平均生存时间比低表达组短。PTPN1阳性表达是影响患者总生存期的独立预后因素。PTPN1有可能成为抗TNBC治疗的潜在靶点。2 PTPN12的表达与患者的年龄和病理分型无关,而与T分期、淋巴结转移状态和TNM分期之间呈负相关性。PTPN12表达为阴性的患者的生存时间短于PTPN12表达为阳性的患者。PTPN12作为抑癌基因,其阳性表达与TNBC患者不良预后呈负相关关系。3在TNBC中EGFR呈高表达状态,与PTPN12蛋白的表达水平具有显著的负相关关系,PTPN12对EGFR有负性调控作用,可能是PTPN12发挥抑癌作用的靶点。