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上皮性卵巢癌的发病率位居女性生殖道恶性肿瘤前三位,已经严重危害妇女健康。有关卵巢癌血清标志物的发现和探索工作历来是卵巢癌防治研究事业的重点对象。有效的血清学标志物将可以帮助临床医生及时发现隐匿于盆腔深处、躯体症状尚不明显的早期卵巢癌病灶,从而提高患者生存率。己知用于区别良性和恶性卵巢肿瘤最为重要的细胞生物学特征在于癌细胞向周围组织侵袭和远处转移的能力,因此如果能够找到更多可以预测盆腔肿瘤转移潜能的血清标志物,将会为临床早期发现卵巢癌患者提供十分关键的诊断学工具。本研究为了寻找与卵巢癌细胞腹腔和淋巴转移相关的血清标志物,建立了裸鼠卵巢癌转移模型,并通过LC-MS/MS分析技术找到了对卵巢癌临床患者有诊断学价值的4种候选标志物:Haptoglobin、14-3-3zeta、L1CAM和C3。同时,通过临床标本,本研究证明前两个候选标志物(Haptoglobin和14-3-3zeta)对于卵巢癌患者腹腔转移事件诊断和鉴别能力都要强于传统标志物CA125,并证明后两个候选标志物(L1CAM和C3)对于卵巢癌患者淋巴转移事件的诊断和鉴别能力也同样强于CA125的作用。继而,本研究将4种候选标志物与CA125、盆腔B超、绝经状态联合使用,构建成了一个新型的恶性风险指数(RMI’)。本研究利用该风险指数,提高了临床对Ⅰ/Ⅱ期卵巢癌患者的诊断准确率。 本研究为了详细解释与维持候选标志物表达状态有关的癌细胞基因组转录调控方式,首次从控制论角度出发,提出了“转录控制理论”。利用“转录因子分析法”,本研究获得了与4种候选标志物蛋白表达调控有关的基因转录控制环路。继而,通过体外实验,本研究证实:由CEBPB、CREB1、JUND和E2F2这4个转录因子构成的转录调控网络在大多数卵巢癌细胞中都起到了支配作用,它们维持了候选标志物:Haptoglobin、14-3-3zeta、L1CAM和C3的表达活动。如果这些转录因子的表达受到抑制,则接受它们调控的4个候选标志物的表达将也同样会遭受到不同程度抑制。本研究进而又分析了4个候选标志物对卵巢癌细胞恶性行为的功能作用。通过RNA干扰实验,本研究证明:(1)Haptoglobin是免疫抑制蛋白,可以帮助癌细胞逃避腹腔巨噬细胞杀伤作用,使进入腹膜组织的卵巢癌细胞存活下来:(2)14-3-3zeta作为细胞内信号传导的接头蛋白,能够激发并增强与癌细胞迁移、侵袭和种植过程有关的细胞信号,从而提高卵巢癌细胞的腹腔转移成功率;(3)L1CAM作为一种细胞膜粘附分子,可介导卵巢癌细胞向局部淋巴组织的趋触性迁移,提高淋巴转移率;但(4)尚不能证实C3有直接促卵巢癌淋巴转移的恶性生物学作用。这些研究成果为临床抗卵巢癌治疗找到了更多药物靶点。 本研究作为从血清肿瘤标志物探索和发现,经肿瘤标志物成因探讨和功能分析,再返回实际应用的一项系统性研发工作,充分考虑到了研制良好检测工具以满足临床诊断应用的要求。为此,在传统ELISA方法基础上,本研究建立起了一个可独立检测4个候选标志物的临床检验体系。同时,为了实现高通量的标志物检测目标,本研究还考察了以蛋白芯片和质谱方法对4个候选标志物和CA125进行同步测定的技术可行性,并提出了改良方案。所有这些研究工作都为今后更多个体化卵巢癌标志物的发展利用奠定了工作基础。